قم بإعداد لمقايسة وراثة RNAi عن طريق اختيار ثلاثة أو أربعة بالغين من Caenorhabditis elegans تحت ألواح NGM القياسية مقاس 35 ملم المصنفة ببكتيريا OP50-1. بعد أربعة أيام ، اغسل الديدان البالغة الجاذبة من الألواح إلى أنابيب سعة 1.5 ملليلتر باستخدام 800 ميكرولتر من المخزن المؤقت M9 المكمل ب Triton X-100. كرر الغسيل واسحب الديدان في أنبوب واحد.
بعد الطرد المركزي للديدان عند 1،000 جم لمدة 1.5 إلى دقيقتين ، قم باستنشاق المادة الطافية تاركا 100 ميكرولتر دون إزعاج حبيبات الدودة. لكل أنبوب يحتوي على حبيبات الدودة ، أضف 650 ميكرولتر من الماء المقطر المزدوج. لعزل أجنة C.elegans عن السكان الذين تم جمعهم ، أضف 250 ميكرولترا من محلول التبييض الطازج وابدأ مؤقتا.
كل دقيقة إلى دقيقتين ، دوامة الأنابيب جيدا. بعد خمس دقائق ، راقب تدهور الديدان البالغة تحت المجسم. استمر في الدوامة حتى تذوب الديدان تماما وتبقى الأجنة فقط.
يستغرق هذا بشكل عام من ست إلى سبع دقائق. قم على الفور بطرد الأنابيب عند 1،000 جم لمدة 1.5 دقيقة واستنشق المادة الطافية ، تاركا ما يقرب من 50 إلى 100 ميكرولتر من المادة الطافية مع الأجنة. أضف ملليلتر واحد من المخزن المؤقت M9 المكمل ب Triton X-100 إلى الأجنة والدوامة.
أجهزة الطرد المركزي التعليق وكرر الغسيل مرتين. بعد الغسيل النهائي ، استنشق المادة الطافية واترك حوالي 100 ميكرولتر في الأنبوب. دوامة الأنابيب مع الأجنة المعزولة وماصة ميكرولتر من كل أنبوب مرتين على شريحة زجاجية موسومة.
عد الأجنة باستخدام عداد إحصاء لتقدير تركيز الأجنة لكل ميكرولتر. لبدء نمو سكاني شبه متزامن ، انقل ما يقرب من 250 جنينا إلى كل لوحة RNAi NGM تحتوي على بكتيريا E.coli HT115 مع GFP أو التحكم في ناقلات RNAi. السماح للسائل لامتصاص.
احتضان جيل P naught المعالج ب RNAi لمدة أربعة أيام عند 21 درجة مئوية.