Bereid dieren voor op de RNAi-overervingstest door drie of vier drachtige Caenorhabditis elegans-volwassenen te plukken onder de standaard NGM-platen van 35 millimeter die zijn ingezaaid met OP50-1-bacteriën. Spoel na vier dagen de drachtige volwassen wormen van de platen in buizen van 1,5 milliliter met 800 microliter M9-buffer aangevuld met Triton X-100. Herhaal de wasbeurt en trek de wormen in één buis.
Na het centrifugeren van de wormen bij 1.000 G gedurende 1,5 tot twee minuten, zuigt u het supernatans op en laat u 100 microliter over zonder de wormkorrel te verstoren. Voeg aan elk buisje met de wormkorrel 650 microliter dubbel gedestilleerd water toe. Om de C.elegans-embryo's uit de verzamelde populatie te isoleren, voegt u 250 microliter van de vers bereide bleekoplossing toe en start u een timer.
Draai de buizen elke één tot twee minuten grondig rond. Controleer na vijf minuten de afbraak van volwassen wormen onder de stereoscoop. Ga door met vortexen totdat de wormen volledig zijn opgelost en er alleen embryo's overblijven.
Dit duurt over het algemeen zes tot zeven minuten. Centrifugeer de buisjes onmiddellijk bij 1.000 G gedurende 1,5 minuut en zuig het supernatant op, waarbij ongeveer 50 tot 100 microliter van het supernatans bij de embryo's blijft. Voeg een milliliter M9-buffer aangevuld met Triton X-100 toe aan de embryo's en vortex.
Centrifugeer de suspensie en herhaal de wasbeurt twee keer. Na de laatste wasbeurt zuigt u het supernatans op en laat u ongeveer 100 microliter in de buis. Draai de buisjes met geïsoleerde embryo's en pipetteer twee keer twee microliter uit elk buisje op een gelabeld objectglaasje.
Tel de embryo's met behulp van een teller om de concentratie embryo's per microliter te schatten. Om een semi-gesynchroniseerde bevolkingsgroei te starten, plaatst u ongeveer 250 embryo's op elke RNAi NGM-plaat die E.coli HT115-bacteriën met GFP of controle-RNAi-vectoren bevat. Laat de vloeistof intrekken.
Incubeer de met RNAi behandelde generatie P gedurende vier dagen bij 21 graden Celsius.
