ओपी 50-1 बैक्टीरिया के साथ बीज ति 35 मिलीमीटर मानक एनजीएम प्लेटों के तहत तीन या चार ग्रेविड केनोरहाब्डिस एलिगेंस वयस्कों को चुनकर आरएनएआई वंशानुक्रम परख के लिए जानवरों को तैयार करें। चार दिनों के बाद, ट्राइटन एक्स -100 के साथ पूरक एम 9 बफर के 800 माइक्रोलीटर का उपयोग करके प्लेटों से ग्रेविड वयस्क कीड़े को 1.5 मिलीलीटर ट्यूबों में धो लें। धोने को दोहराएं और कीड़े को एक ट्यूब में खींचें।
1.5 से दो मिनट के लिए 1,000 जी पर कीड़े को सेंट्रीफ्यूज करने के बाद, कीड़े के गोली को परेशान किए बिना 100 माइक्रोलीटर छोड़ने वाले सुपरनैटेंट को एस्पिरेट करें। कीड़े की गोली वाली प्रत्येक ट्यूब में, 650 माइक्रोलीटर डबल आसुत जल जोड़ें। एकत्रित आबादी से सी एलिगेंस भ्रूण को अलग करने के लिए, ताजा तैयार ब्लीचिंग समाधान के 250 माइक्रोलीटर जोड़ें और एक टाइमर शुरू करें।
हर एक से दो मिनट में, ट्यूबों को अच्छी तरह से भंवर करें। पांच मिनट के बाद, स्टीरियोस्कोप के तहत वयस्क कीड़े के क्षरण की निगरानी करें। जब तक कीड़े पूरी तरह से घुल न जाएं और केवल भ्रूण न रह जाएं, तब तक भंवर जारी रखें।
इसमें आमतौर पर छह से सात मिनट लगते हैं। तुरंत ट्यूबों को 1.5 मिनट के लिए 1,000 ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज करें और सतह पर तैरने वाले को एस्पिरेट करें, जिससे भ्रूण के साथ लगभग 50 से 100 माइक्रोलीटर सुपरनैटेंट बच जाए। भ्रूण और भंवर में ट्राइटन एक्स -100 के साथ पूरक एम 9 बफर का एक मिलीलीटर जोड़ें।
सस्पेंशन को सेंट्रीफ्यूज करें और धोने को दो बार दोहराएं। अंतिम धोने के बाद, सतह पर तैरनेवाला को एस्पिरेट करें और ट्यूब में लगभग 100 माइक्रोलीटर छोड़ दें। अलग-अलग भ्रूण के साथ ट्यूबों को भंवर करें और प्रत्येक ट्यूब से दो माइक्रोलीटर को लेबल ग्लास स्लाइड पर दो बार पिपेट करें।
प्रति माइक्रोलीटर भ्रूण की एकाग्रता का अनुमान लगाने के लिए टैली काउंटर का उपयोग करके भ्रूण की गणना करें। अर्ध-सिंक्रनाइज़ जनसंख्या वृद्धि शुरू करने के लिए, जीएफपी के साथ ई.कोलाई एचटी 115 बैक्टीरिया युक्त प्रत्येक आरएनएआई एनजीएम प्लेट पर लगभग 250 भ्रूण स्थानांतरित करें या आरएनएआई वैक्टर को नियंत्रित करें। तरल को अवशोषित होने दें।
21 डिग्री सेल्सियस पर चार दिनों के लिए आरएनएआई के साथ इलाज किए गए पी नॉट पीढ़ी को इनक्यूबेट करें।