Forbered dyr for RNAi-arveanalysen ved å plukke tre eller fire gravide Caenorhabditis elegans voksne under 35 millimeter standard NGM-plater frøet med OP50-1-bakterier. Etter fire dager, vask de gravide voksne ormene av platene i 1,5 milliliter rør med 800 mikroliter M9-buffer supplert med Triton X-100. Gjenta vasken og trekk ormene inn i ett rør.
Etter å ha sentrifugert ormene ved 1.000 G i 1,5 til to minutter, aspirerer supernatanten og forlater 100 mikroliter uten å forstyrre ormpelleten. Til hvert rør som inneholder ormepelleten, tilsett 650 mikroliter dobbelt destillert vann. For å isolere C.elegans-embryoene fra den innsamlede populasjonen, tilsett 250 mikroliter av den nytilberedte blekeløsningen og start en timer.
Hvert og ett til to minutter, virv rørene grundig. Etter fem minutter må du overvåke nedbrytningen av voksne ormer under stereoskopet. Fortsett vortexing til ormene er helt oppløst og bare embryoer forblir.
Dette tar vanligvis seks til syv minutter. Sentrifuge rørene umiddelbart ved 1.000 G i 1,5 minutter og aspirer supernatanten, og etterlater ca. 50 til 100 mikroliter av supernatanten med embryoene. Tilsett en milliliter M9-buffer supplert med Triton X-100 til embryoer og virvel.
Sentrifuger suspensjonen og gjenta vasken to ganger. Etter den siste vasken, aspirer supernatanten og la det være ca. 100 mikroliter i røret. Vortex rørene med isolerte embryoer og pipett to mikroliter fra hvert rør to ganger på et merket glassglass.
Tell embryoene ved hjelp av en tellteller for å estimere konsentrasjonen av embryoer per mikroliter. For å starte en semi-synkronisert befolkningsvekst, overfør ca. 250 embryoer til hver RNAi NGM-plate som inneholder E.coli HT115-bakterier med GFP eller kontroll-RNAi-vektorer. La væsken absorbere.
Inkubere P-generasjonen behandlet med RNAi i fire dager ved 21 grader Celsius.