Подготовьте животных к анализу наследования РНК-интерференции, отобрав три или четыре взрослых особи Caenorhabditis elegans под 35-миллиметровыми стандартными пластинами NGM, засеянными бактериями OP50-1. Через четыре дня смойте взрослых червей с планшетов в пробирки объемом 1,5 миллилитра, используя 800 микролитров буфера M9 с добавлением Triton X-100. Повторите стирку и стяните червей в одну пробирку.
После центрифугирования червей при 1,000 G в течение 1,5-2 минут отсасывайте надосадочную жидкость, оставляя 100 микролитров, не повреждая гранулы червя. В каждую пробирку, содержащую гранулу червя, добавьте 650 микролитров воды двойной дистиллированной воды. Чтобы выделить эмбрионы C.elegans из собранной популяции, добавьте 250 микролитров свежеприготовленного отбеливающего раствора и запустите таймер.
Каждые одну-две минуты тщательно встряхивайте трубки. Через пять минут проследите за деградацией взрослых червей под стереоскопом. Продолжайте вихрь до тех пор, пока черви полностью не растворятся и не останутся только эмбрионы.
Обычно это занимает шесть-семь минут. Немедленно центрифугируйте пробирки при концентрации 1000 г в течение 1,5 минут и аспирируйте надосадочную жидкость, оставляя примерно от 50 до 100 микролитров надосадочной жидкости с эмбрионами. Добавьте один миллилитр буфера М9 с добавлением Triton X-100 к эмбрионам и встряхните.
Центрифугируйте суспензию и повторите промывку два раза. После окончательной промывки аспирируйте надосадочную жидкость и оставьте примерно 100 микролитров в пробирке. Вмешайте пробирки с изолированными эмбрионами и пипеткой по два микролитра из каждой пробирки дважды на меченое предметное стекло.
Подсчитайте эмбрионы с помощью счетчика, чтобы оценить концентрацию эмбрионов на микролитр. Чтобы начать полусинхронизированный рост популяции, перенесите около 250 эмбрионов на каждую РНК-интерференционную пластину NGM, содержащую бактерии E.coli HT115 с GFP или контрольными векторами РНК-интерференции. Дайте жидкости впитаться.
Инкубируйте поколение P, обработанное РНК-интерференцией, в течение четырех дней при температуре 21 градус Цельсия.