Preparar a los animales para el ensayo de herencia de ARNi eligiendo tres o cuatro adultos grávidos de Caenorhabditis elegans bajo las placas NGM estándar de 35 milímetros sembradas con la bacteria OP50-1. Después de cuatro días, lave los gusanos adultos grávidos de las placas en tubos de 1,5 mililitros utilizando 800 microlitros de tampón M9 suplementado con Triton X-100. Repita el lavado y coloque las lombrices en un tubo.
Después de centrifugar los gusanos a 1.000 G durante 1,5 a dos minutos, aspire el sobrenadante dejando 100 microlitros sin perturbar el gránulo del gusano. A cada tubo que contenga el gránulo de gusano, agregue 650 microlitros de agua bidestilada. Para aislar los embriones de C. elegans de la población recolectada, agregue 250 microlitros de la solución blanqueadora recién preparada y encienda un temporizador.
Cada uno o dos minutos, haga un vórtice de los tubos a fondo. Después de cinco minutos, controle la degradación de los gusanos adultos bajo el estereoscopio. Continúe el vórtice hasta que los gusanos se disuelvan por completo y solo queden embriones.
Por lo general, esto toma de seis a siete minutos. Centrifugar inmediatamente los tubos a 1.000 G durante 1,5 minutos y aspirar el sobrenadante, dejando aproximadamente de 50 a 100 microlitros del sobrenadante con los embriones. Añadir un mililitro de tampón M9 suplementado con Triton X-100 a los embriones y al vórtice.
Centrifugar la suspensión y repetir el lavado dos veces. Después del lavado final, aspirar el sobrenadante y dejar aproximadamente 100 microlitros en el tubo. Agite los tubos con embriones aislados y pipetee dos microlitros de cada tubo dos veces en un portaobjetos de vidrio etiquetado.
Cuente los embriones usando un contador de conteo para estimar la concentración de embriones por microlitro. Para iniciar un crecimiento poblacional semisincronizado, transfiera aproximadamente 250 embriones a cada placa NGM de ARNi que contenga bacterias E.coli HT115 con GFP o vectores de ARNi de control. Deja que el líquido se absorba.
Incubar la generación de P naught tratada con ARNi durante cuatro días a 21 grados centígrados.