Förbered djuren för RNAi-nedärvningsanalysen genom att välja tre eller fyra dräktiga vuxna Caenorhabditis elegans under 35 millimeters standard NGM-plattor sådda med OP50-1-bakterier. Efter fyra dagar tvättar du bort de gravida vuxna maskarna från plattorna i 1,5 milliliters rör med 800 mikroliter M9-buffert kompletterad med Triton X-100. Upprepa tvätten och dra in maskarna i ett rör.
Efter centrifugering av maskarna vid 1 000 g i 1,5 till två minuter, aspirera supernatanten och lämna 100 mikroliter utan att störa maskpelleten. Tillsätt 650 mikroliter dubbeldestillerat vatten till varje rör som innehåller maskpelleten. För att isolera C. elegans-embryon från den insamlade populationen, tillsätt 250 mikroliter av den nyberedda blekningslösningen och starta en timer.
Var och varannan minut, virvla rören ordentligt. Efter fem minuter övervakas nedbrytningen av vuxna maskar under stereoskopet. Fortsätt virvla tills maskarna är helt upplösta och endast embryon återstår.
Detta tar vanligtvis sex till sju minuter. Centrifugera omedelbart rören vid 1 000 G i 1,5 minuter och aspirera supernatanten, så att cirka 50 till 100 mikroliter av supernatanten lämnas kvar hos embryona. Tillsätt en milliliter M9-buffert kompletterad med Triton X-100 till embryona och virveln.
Centrifugera suspensionen och upprepa tvätten två gånger. Efter den sista tvätten, aspirera supernatanten och lämna cirka 100 mikroliter i röret. Virvla rören med isolerade embryon och pipettera två mikroliter från varje rör två gånger på ett märkt glasglas.
Räkna embryona med hjälp av en räkneräknare för att uppskatta koncentrationen av embryon per mikroliter. För att starta en halvsynkroniserad populationstillväxt, överför cirka 250 embryon till varje RNAi NGM-platta som innehåller E.coli HT115-bakterier med GFP- eller kontroll-RNAi-vektorer. Låt vätskan absorberas.
Inkubera P-styggtgenerationen som behandlats med RNAi i fyra dagar vid 21 grader Celsius.