通过使用玻璃巴斯德移液管将一滴融化的1%琼脂糖放在黑胶唱片上,开始制备琼脂糖垫。定向载玻片,使记录上的线条水平或垂直,然后将载玻片快速放在琼脂糖滴上 30 秒。从记录中取出载玻片,在立体镜下加入约5微升新鲜制备的5毫摩尔左旋咪唑。
轻轻轻弹含有蠕虫的试管,并将 5 至 10 微升转移到琼脂糖垫上以安装蠕虫。估计添加蠕虫的数量,以便每次重复大约有 40 个蠕虫。使用睫毛镐将蠕虫排成一排,并将玻璃盖玻片放在载玻片上。
使用漂白方案将胚胎与剩余的蠕虫分离,并将250个胚胎接种在接种有OP50-1细菌的35毫米NGM板上。在荧光立体镜下,使用GFP滤光片组,并使用计数计数器计数并记录每个重复载玻片上GFP阳性和GFP阴性蠕虫的数量。对每一代种系中核GFP信号的手动评分表明,转基因的沉默在用GFP RNAi处理的评分P0和F1蠕虫中是完全渗透的。
在F2世代中,表现出GFP沉默遗传的群体比例约为50%到F5世代,大多数群体没有表现出沉默的遗传。到F10代时,所有蠕虫均表达GFP,未检测到遗传。