Commencez à préparer les tampons d’agarose en déposant une goutte d’agarose fondue 1% sur le disque vinyle à l’aide d’une pipette Pasteur en verre. Orientez une lame de verre de manière à ce que les lignes du disque soient horizontales ou verticales, et placez rapidement la lame sur la goutte d’agarose pendant 30 secondes. Retirez la lame de verre du disque et ajoutez environ cinq microlitres de lévamisole de cinq millimolaires fraîchement préparés sous le stéréoscope.
Faites glisser doucement le tube contenant les vers et transférez 5 à 10 microlitres sur le tampon d’agarose pour monter les vers. Estimez le nombre de vers au fur et à mesure qu’ils sont ajoutés afin qu’il y ait environ 40 vers par répétition. Alignez les vers en rangées à l’aide d’un cure-cils et placez une lamelle en verre sur la lame.
Isolez les embryons des vers restants en utilisant le protocole de blanchiment et plaquez 250 embryons sur des plaques NGM de 35 millimètres ensemencées avec la bactérie OP50-1. Sous le stéréoscope fluorescent, utilisez un ensemble de filtres GFP et comptez et enregistrez le nombre de vers GFP positifs et négatifs GFP sur les lames pour chaque répétition à l’aide d’un compteur de comptage. Le marquage manuel du signal GFP nucléaire dans la lignée germinale pour chaque génération a montré que le silençage du transgène était complètement pénétrant chez les vers P0 et F1 marqués traités avec l’ARNi GFP.
Dans la génération F2, la proportion de la population présentant l’hérédité du silençage de la GFP était d’environ 50 %Dans la génération F5, la majorité de la population n’a pas montré l’hérédité du silençage. À la génération F10, tous les vers exprimaient la GFP et aucun héritage n’a été détecté.