ग्लास पाश्चर पाइप का उपयोग करके विनाइल रिकॉर्ड पर पिघले हुए 1% एग्रोज की एक बूंद रखकर एगारोस पैड तैयार करना शुरू करें। एक ग्लास स्लाइड को उन्मुख करें ताकि रिकॉर्ड पर लाइनें क्षैतिज या ऊर्ध्वाधर हों, और स्लाइड को 30 सेकंड के लिए अगारोस ड्रॉप पर जल्दी से रखें। रिकॉर्ड से ग्लास स्लाइड को हटा दें और स्टीरियोस्कोप के नीचे ताजा तैयार पांच मिलीमोलर लेवामिसोल के लगभग पांच माइक्रोलीटर जोड़ें।
कीड़े युक्त ट्यूब को धीरे से फ्लिक करें और कीड़े को माउंट करने के लिए 5 से 10 माइक्रोलीटर को अगारोस पैड पर स्थानांतरित करें। कीड़े की संख्या का अनुमान लगाएं क्योंकि उन्हें जोड़ा जा रहा है ताकि प्रति प्रतिकृति लगभग 40 कीड़े हों। कीड़े को आईलैश पिक का उपयोग करके पंक्तियों में पंक्तिबद्ध करें, और स्लाइड पर एक ग्लास कवरस्लिप रखें।
ब्लीचिंग प्रोटोकॉल का उपयोग करके शेष कीड़े से भ्रूण को अलग करें और ओपी 50-1 बैक्टीरिया के साथ बीज ति 35 मिलीमीटर एनजीएम प्लेटों पर 250 भ्रूण प्लेट करें। फ्लोरोसेंट स्टीरियोस्कोप के तहत, जीएफपी फिल्टर सेट का उपयोग करें और टैली काउंटर का उपयोग करके प्रत्येक प्रतिकृति के लिए स्लाइड पर जीएफपी पॉजिटिव और जीएफपी नकारात्मक कीड़े की संख्या को गिनें और रिकॉर्ड करें। प्रत्येक पीढ़ी के लिए जर्मलाइन में परमाणु जीएफपी सिग्नल के मैनुअल स्कोरिंग से पता चला कि जीएफपी आरएनएआई के साथ इलाज किए गए स्कोर किए गए पी 0 और एफ 1 कीड़े में ट्रांसजीन की साइलेंसिंग पूरी तरह से पेनेट्रेंट थी।
एफ 2 पीढ़ी में, जीएफपी साइलेंसिंग की विरासत का प्रदर्शन करने वाली आबादी का अनुपात लगभग 50% था, एफ 5 पीढ़ी तक, अधिकांश आबादी ने चुप कराने की विरासत नहीं दिखाई। एफ 10 पीढ़ी तक, सभी कीड़े जीएफपी व्यक्त करते हैं और कोई विरासत का पता नहीं चला था।
