Comece a preparar as almofadas de agarose colocando uma gota de agarose derretida a 1% no disco de vinil usando uma pipeta de vidro Pasteur. Oriente uma lâmina de vidro para que as linhas no registro sejam horizontais ou verticais e coloque a lâmina rapidamente sobre a gota de agarose por 30 segundos. Retire a lâmina de vidro do registro e adicione aproximadamente cinco microlitros de levamisol de cinco milimolares recém-preparados sob o estereoscópio.
Agite suavemente o tubo contendo vermes e transfira 5 a 10 microlitros para a almofada de agarose para montar os vermes. Estime o número de worms à medida que eles estão sendo adicionados para que haja aproximadamente 40 worms por replicação. Alinhe os vermes em fileiras usando uma picareta de cílios e coloque uma tampa de vidro no escorregador.
Isolar os embriões dos vermes remanescentes usando o protocolo de branqueamento e placa 250 embriões em placas NGM de 35 milímetros semeadas com bactérias OP50-1. Sob o estereoscópio fluorescente, use um conjunto de filtros GFP e conte e registre o número de worms GFP positivos e negativos de GFP nas lâminas para cada réplica usando um contador de contagem. A pontuação manual do sinal nuclear de GFP na linha germinativa para cada geração mostrou que o silenciamento do transgene foi totalmente penetrante nos vermes P0 e F1 tratados com RNAi de GFP.
Na geração F2, a proporção da população exibindo herança do silenciamento de GFP foi de aproximadamente 50%Na geração F5, a maioria da população não mostrou a herança do silenciamento. Na geração F10, todos os vermes expressaram GFP e nenhuma herança foi detectada.