Börja förbereda agaroskuddarna genom att placera en droppe smält 1% agaros på vinylskivan med hjälp av en Pasteurpipett i glas. Orientera en glasskiva så att linjerna på skivan är horisontella eller vertikala, och placera bilden snabbt på agarosdroppen i 30 sekunder. Ta bort glasglaset från skivan och tillsätt cirka fem mikroliter nyberedd fem millimolar levamisol under stereoskopet.
Snärta försiktigt röret som innehåller maskar och överför 5 till 10 mikroliter på agarosdynan för att montera maskarna. Uppskatta antalet maskar när de läggs till så att det finns cirka 40 maskar per replikat. Rada upp maskarna i rader med hjälp av en ögonfransplockning och placera ett glastäcke på glaset.
Isolera embryona från de återstående maskarna med hjälp av blekningsprotokollet och platta 250 embryon på 35 millimeter NGM-plattor sådda med OP50-1-bakterier. Under det fluorescerande stereoskopet, använd en GFP-filteruppsättning och räkna och registrera antalet GFP-positiva och GFP-negativa maskar på objektglasen för varje replikat med hjälp av en räkneräknare. Den manuella poängsättningen av den nukleära GFP-signalen i könscellen för varje generation visade att nedtystningen av transgenen var helt penetrerande i de poängsatta P0- och F1-maskarna som behandlades med GFP RNAi.
I F2-generationen var andelen av befolkningen som uppvisade nedärvning av GFP-nedtystning cirka 50 %I F5-generationen uppvisade majoriteten av befolkningen inte nedärvning av nedtystning. Vid F10-generationen uttryckte alla maskar GFP och ingen nedärvning upptäcktes.
