90-120 마이크로 리터의 포름 알데히드 가교 된 C.Elegans 샘플을 폴리스티렌 초음파 처리 튜브에 혼합하고 분주하는 것으로 시작하십시오. 2X 세제가 포함된 동일한 양의 재현탁 버퍼를 추가합니다. 수조 초음파 발생기에서 7분 동안 초음파 처리합니다.
피펫팅으로 샘플을 부드럽게 혼합하고 추가로 7분 동안 초음파 처리를 반복합니다. 완료되면 초음파 처리 된 용해물을 1.5 밀리리터 튜브로 옮깁니다. 세제 없이 재현탁 버퍼의 절반을 추가합니다.
13, 4 섭씨 온도에 15 분 동안 000 G에 원심분리기 후에, 4개 부품으로 용해물 상층액을 분할한다. 입력 용해물 부분을 섭씨 영하 20도에서 1.5밀리리터 튜브에 보관합니다. 0.5마이크로그램의 항-H3K9 트리메틸화, 항-히스톤 H3 또는 IgG를 적절한 면역침전 또는 IP 샘플에 첨가합니다.
회전하면서 섭씨 4도에서 하룻밤 동안 반응을 배양합니다. 다음 날, 1.5 밀리리터 튜브에 IP 샘플당 9 마이크로리터의 단백질 G 코팅 마그네틱 비드를 분취했습니다. FA-150 1 밀리리터로 두 번 세척 한 후 FA-150 버퍼에 마그네틱 비드를 다시 현탁시킵니다.
완료되면 7.5 마이크로리터의 마그네틱 비드 현탁액을 각 IP 항체 혼합물에 첨가한 후 섭씨 4도에서 회전하면서 2시간 동안 튜브를 배양합니다. 다음으로, 각 완충 용액의 최소 200 마이크로리터를 사용하여 자성 비드를 7회 세척합니다. 각 세척액을 섭씨 4도에서 5분 동안 회전하면서 배양한 후 마그네틱 스탠드에 구슬을 모아 세척제를 흡인합니다.
완충액의 마지막 세척을 흡인한 후 50마이크로리터의 크로마틴 IP 용출 완충액에 마그네틱 비드를 재현탁시키고 1.5밀리리터 튜브로 옮깁니다. ThermoMixer에서 시료를 용리한 후 마그네틱 스탠드에 비드를 모으고 상층액을 새 튜브로 옮깁니다. 다른 50마이크로리터의 염색질 면역침전 용출 완충액으로 용출을 반복합니다.
완료되면 역 가교 및 DNA 용출을 진행하기 전에 총 100마이크로리터의 상층액을 끌어당깁니다.