للبدء ، قم بإعداد قطرات من M2 IBMX Medium في طبق زراعة الأنسجة البلاستيكية ، وضع الطبق على كتلة ساخنة عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة على الأقل قبل عزل البويضة. تشريح المبايض من الفئران القتل الرحيم ووضعها في أنبوب القاع المستدير خمسة ملليلتر مع M2 IBMX. نقل المبايض إلى غطاء بلاستيكي يحتوي على 1.5 ملليلتر من M2 IBMX.
قم بإزالة أي أنسجة دهنية حول المبيض ، أو أجزاء قناة فالوب ، وحرر مجمعات البويضات الركامية عن طريق ثقب ميكانيكي للمبيض بإبرة قياس 27. نقل مجمعات البويضات الركامية إلى طبق ثقافة مع قطرات من M2 IBMX. وقم بإزالة الخلايا الركامية عن طريق السحب المتكرر باستخدام ماصة مرعى زجاجية ضيقة التجويف.
حدد الحويصلة الجرثومية للنواة المحيطة أو بويضات المرحلة GV ، وانقلها في قطرة من وسط M2 IBMX على كتلة ساخنة عند 37 درجة مئوية محمية من الضوء. بعد إحداث فواصل مزدوجة باستخدام etoposide ، ضع بويضات مرحلة GV في قطرات من العامل السام للجينات لمدة ساعة واحدة على الكتلة الساخنة في الظلام. أضف قطرات من وسط زراعة M16 المكمل ب 400 ميكرومولار IBMX إلى البويضات لإبقائها محتجزة لفترة طويلة.
ضع البويضات في حاضنة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون.