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01:58 min
June 23rd, 2023
DOI :
10.3791/200313-v
Transcript
首先,在塑料组织培养皿中准备M2 IBMX培养基滴剂,并将培养皿放在37摄氏度的热块上至少30分钟,然后再分离卵母细胞。解剖安乐死小鼠的卵巢,并将它们放入带有M2 IBMX的五毫升圆底管中。将卵巢转移到含有1.5毫升M2 IBMX的塑料盖上。
去除任何卵巢周围脂肪组织或输卵管段,并通过用 27 号针对卵巢进行机械穿孔来释放卵丘卵母细胞复合物。将卵丘卵母细胞复合物转移到带有M2 IBMX滴剂的培养皿中。并使用窄口径玻璃牧场移液管重复移液去除积云细胞。
选择包围的细胞核生发囊泡或GV期卵母细胞,并将它们转移到37摄氏度避光热块上的M2 IBMX培养基中。使用依托泊苷诱导双链断裂后,将GV期卵母细胞滴在基因毒性剂滴剂中,在黑暗中在热块上放置一小时。向卵母细胞中加入补充有400微摩尔IBMX的M16培养基滴剂,以使其长时间停滞。
将卵母细胞置于37摄氏度和5%二氧化碳的培养箱中。
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