शुरू करने के लिए, एक प्लास्टिक टिशू कल्चर डिश में एम 2 आईबीएमएक्स मीडियम की बूंदें तैयार करें, और डिश को अंडाणु अलगाव से पहले कम से कम 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर गर्म ब्लॉक पर रखें। इच्छामृत्यु वाले चूहों के अंडाशय को विच्छेदित करें और उन्हें एम 2 आईबीएमएक्स के साथ पांच मिलीलीटर गोल नीचे ट्यूब में रखें। अंडाशय को एक प्लास्टिक के ढक्कन में स्थानांतरित करें जिसमें 1.5 मिलीलीटर एम 2 आईबीएमएक्स हो।
किसी भी पेरी-डिम्बग्रंथि वसा ऊतक, या फैलोपियन ट्यूब खंडों को हटा दें, और 27-गेज सुई के साथ अंडाशय के यांत्रिक छिद्र द्वारा क्यूमुलस अंडाणु परिसरों को छोड़ दें। क्यूमुलस ओओसाइट कॉम्प्लेक्स को एम 2 आईबीएमएक्स की बूंदों के साथ एक कल्चर डिश में स्थानांतरित करें। और एक संकीर्ण बोर ग्लास चरागाह पिपेट का उपयोग करके बार-बार पाइप िंग करके क्यूमुलस कोशिकाओं को हटा दें।
चारों ओर से घिरे हुए न्यूक्लियस जर्मिनल पुटिका या जीवी चरण अंडाणुओं का चयन करें, और उन्हें प्रकाश से सुरक्षित 37 डिग्री सेल्सियस पर गर्म ब्लॉक पर एम 2 आईबीएमएक्स माध्यम की एक बूंद में स्थानांतरित करें। एटोपोसाइड का उपयोग करके डबल स्ट्रैंड ब्रेक को प्रेरित करने के बाद, अंधेरे में गर्म ब्लॉक पर एक घंटे के लिए जीनोटॉक्सिक एजेंट की बूंदों में जीवी चरण अंडाणुओं को रखें। एम16 कल्चर माध्यम की बूंदों को 400 माइक्रोमोलर आईबीएमएक्स के साथ अंडाणुओं में मिलाएं ताकि उन्हें लंबे समय तक गिरफ्तार रखा जा सके।
अंडाणुओं को इनक्यूबेटर में 37 डिग्री सेल्सियस और 5% कार्बन डाइऑक्साइड पर रखें।