Para começar, prepare gotas de M2 IBMX Medium em uma placa de cultura de tecido plástico e coloque a placa em um bloco quente a 37 graus Celsius por pelo menos 30 minutos antes do isolamento dos ovócitos. Dissecar os ovários dos camundongos eutanasiados e colocá-los em um tubo de fundo redondo de cinco mililitros com M2 IBMX. Transfira os ovários para uma tampa plástica contendo 1,5 mililitros de M2 IBMX.
Remova qualquer tecido adiposo periovariano, ou segmentos das tubas uterinas, e libere os complexos de ovócitos cumulus por perfuração mecânica dos ovários com uma agulha de calibre 27. Transfira os complexos de ovócitos cumulus para uma placa de cultura com gotas de M2 IBMX. E remova as células do cumulus por pipetagem repetida usando uma pipeta de pastagem de vidro de furo estreito.
Selecione a vesícula germinativa do núcleo circundante ou os ovócitos em estágio de GV e transfira-os em uma gota de meio M2 IBMX em bloco quente a 37 graus Celsius protegido da luz. Após a indução de quebras de fita dupla com etoposídeo, colocar os ovócitos em estágio de GV em gotas do agente genotóxico por uma hora sobre o bloco quente no escuro. Adicionar gotas de meio de cultura M16 suplementado com 400 micromolares IBMX aos ovócitos para mantê-los presos por um período prolongado.
Coloque os ovócitos em uma incubadora a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono.
