Para comenzar, prepare gotas de M2 IBMX Medium en una placa plástica de cultivo de tejidos y coloque la placa en un bloque caliente a 37 grados centígrados durante al menos 30 minutos antes del aislamiento de ovocitos. Diseccionar los ovarios de los ratones sacrificados y colocarlos en un tubo inferior redondo de cinco mililitros con M2 IBMX. Transfiera los ovarios a una tapa de plástico que contenga 1.5 mililitros de M2 IBMX.
Extirpar cualquier tejido adiposo periovárico o segmentos de trompas de Falopio, y liberar los complejos de ovocitos del cúmulo mediante la perforación mecánica de los ovarios con una aguja de calibre 27. Transferir los complejos ovocitarios cúmulos a una placa de cultivo con gotas de M2 IBMX. Y elimine las células del cúmulo mediante pipeteo repetido con una pipeta de vidrio de orificio estrecho.
Seleccionar el núcleo rodeado de la vesícula germinal o los ovocitos en estadio GV, y transferirlos en una gota de medio M2 IBMX sobre bloque caliente a 37 grados centígrados protegidos de la luz. Después de inducir roturas de doble cadena con etopósido, coloque los ovocitos en estadio GV en gotas del agente genotóxico durante una hora en el bloque caliente en la oscuridad. Añadir gotas de medio de cultivo M16 suplementado con IBMX de 400 micromolares a los ovocitos para mantenerlos detenidos durante un periodo prolongado.
Colocar los ovocitos en una incubadora a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono.
