Name: Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina
Uploaded: 2023-06-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina at JoVE.com

ex vivo confocal imaging of mouse retina

Allineamento del fibrogramma OCT della retina del topo con immagini confocali

Retinal ganglion cells (RGCs) play a critical role in visual information processing, receiving synaptic inputs through their dendritic trees in the inner plexiform layer (IPL) and transmitting the information via their axons in the retinal nerve fiber layer (RNFL) to the brain1,2,3,4. In diseased conditions such as glaucoma, early RGC degeneration may result in subtle changes in the RNFL, the ganglion cell layer (GCL), the IPL, and the optic nerve in both patients and rodent models5,6,7,8,9. Early detection of these morphological changes in RGCs is thus essential for timely intervention to prevent RGC and vision loss.
We have recently developed a new clinical-ready imaging technology called visible-light optical coherence tomography (vis-OCT) to satisfy the need for in vivo monitoring of RGC damage. Vis-OCT improved the axial resolution, reaching 1.3 &#181;m in the retina10, 11, allowing for the visualization of individual RGC axon bundles in the RNFL. Subsequently, vis-OCT fibergraphy (vis-OCTF) was established to track and quantify RGC damage at the single axon bundle level in mice11,12,13. However, ex vivo confocal imaging of the same retina as the gold standard is often necessary to validate the in vivo findings. Therefore, this study will demonstrate how to align in vivo images acquired by vis-OCTF with ex vivo confocal images of the same mouse retina. The protocol aims to validate the in vivo findings by ex vivo confocal imaging and establish a foundation for examining the molecular and cellular changes underlying RGC damage in diseased conditions.

Autore in primo piano: Progressi nell'imaging retinico in vivo ed ex vivo per migliorare la diagnosi e il trattamento del glaucoma 

Allineamento di fibrogrammi per tomografia a coerenza ottica a luce visibile con immagini confocali della stessa retina murina

We present a protocol for aligning in vivo VIS-OCT images with ex vivo immunostained retinal nerve fibers to validate our novel imaging technology. VIS-OCT enables visualization of retinal nerve fibers in vivo, and this process confirms the accuracy of our findings. Our protocol combines in vivo and ex vivo imaging to provide a real time visualization of retina structure and confirm findings.The process is applicable to mouse models of eye diseases, provided the anterior eye portion allows for optical imaging. This includes diabetic retinopathy and retinal ischemia models. These studies lay the foundation for establishing an objective evaluation of neuro damage in humans, which can significantly improve glaucoma diagnosis and treatment in the future.

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina at JoVE.com

Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina  

Imaging confocale ex vivo della retina del topo

Enucleare gli occhi di un topo soppresso, marcando il lato temporale a scopo di orientamento. Rimuovere la camera anteriore. Quindi rimuovere il cristallino e il vitreo e posizionare le conchiglie oculari in paraformaldeide per 30 minuti.Lavare le conchiglie oculari con PBS per 30 minuti. Sostituzione della soluzione tre volte. Quindi, lavare con Triton X-100 allo 0,5% per 30 minuti.Incubare le conchiglie oculari nel tampone bloccante per due ore a temperatura ambiente. Dopo l'immunocolorazione, isolare le retine dalle conchiglie oculari utilizzando un microscopio. Dividi le retine in quattro foglie e montale in piano con lo strato di cellule gangliari retiniche rivolto verso l'alto.Assicurarsi che il segno sul lato temporale rimanga attaccato per l'orientamento. Coprire le retine con il mezzo di montaggio. Posizionare i vetrini di copertura.E sigilla i vetrini con lo smalto. Accendere il microscopio confocale e, in modalità Localizzazione, individuare l'area di interesse utilizzando l'oculare. Passa alla modalità di acquisizione e imposta i riquadri in modo che coprano l'intera retina, insieme alle sezioni Z-Stack per tutti i livelli di informazioni.Visualizza almeno 25 tessere su tutta la retina per ottenere un volume totale. Proietta le fette Z-Stack per generare immagini bidimensionali di microscopia confocale sul viso. Il fibrogramma composito vis-OCT viene confrontato con la corrispondente immagine confocale della retina piatta immunocolorata con TuJ1 per gli assoni RGC.I vasi sanguigni mostrano strutture ramificate distinguibili che possono essere abbinate ai vasi sanguigni marcati ICAM-2 sull'immagine confocale. Il confronto fianco a fianco tra microscopia confocale ex vivo e in vivo vis-OCT ha rivelato reti identiche di fasci assoniali RGC e vascolarizzazione retinica circostante.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina

Alignment of Visible-Light Optical Coherence Tomography Fibergrams with Confocal Images of the Same Mouse Retina

In recent years, in vivo retinal imaging, which provides non-invasive, real-time, and longitudinal information about biological systems and processes, has ...

Ricerca

Neuroscienze

In Vivo Visible Light Optical Coherence Tomography (OCT) Mouse Retinal Imaging

Tomografia a coerenza ottica (OCT) a luce visibile in vivo Imaging retinico di topo

Alignment of In Vivo and Ex Vivo Mouse Retinal Images

Allineamento di immagini retiniche di topo in vivo ed ex vivo