Name: Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina
Uploaded: 2023-06-30T13:00:00
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ex vivo confocal imaging of mouse retina

마우스 Retina OCT Fibergram Alignment with Confocal Images

Retinal ganglion cells (RGCs) play a critical role in visual information processing, receiving synaptic inputs through their dendritic trees in the inner plexiform layer (IPL) and transmitting the information via their axons in the retinal nerve fiber layer (RNFL) to the brain1,2,3,4. In diseased conditions such as glaucoma, early RGC degeneration may result in subtle changes in the RNFL, the ganglion cell layer (GCL), the IPL, and the optic nerve in both patients and rodent models5,6,7,8,9. Early detection of these morphological changes in RGCs is thus essential for timely intervention to prevent RGC and vision loss.
We have recently developed a new clinical-ready imaging technology called visible-light optical coherence tomography (vis-OCT) to satisfy the need for in vivo monitoring of RGC damage. Vis-OCT improved the axial resolution, reaching 1.3 &#181;m in the retina10, 11, allowing for the visualization of individual RGC axon bundles in the RNFL. Subsequently, vis-OCT fibergraphy (vis-OCTF) was established to track and quantify RGC damage at the single axon bundle level in mice11,12,13. However, ex vivo confocal imaging of the same retina as the gold standard is often necessary to validate the in vivo findings. Therefore, this study will demonstrate how to align in vivo images acquired by vis-OCTF with ex vivo confocal images of the same mouse retina. The protocol aims to validate the in vivo findings by ex vivo confocal imaging and establish a foundation for examining the molecular and cellular changes underlying RGC damage in diseased conditions.

저자 스포트라이트: 녹내장 진단 및 치료 개선을 위한 In Vivo 및 Ex Vivo 망막 영상의 발전 

Align of Visible-Light Optical Coherence Tomography Fibergrams with Confocal Images of the Same Mouse Retina(가시광선 광간섭 단층 촬영 파이버그램과 동일한 마우스 망막의 컨포칼 이미지 정렬)

We present a protocol for aligning in vivo VIS-OCT images with ex vivo immunostained retinal nerve fibers to validate our novel imaging technology. VIS-OCT enables visualization of retinal nerve fibers in vivo, and this process confirms the accuracy of our findings. Our protocol combines in vivo and ex vivo imaging to provide a real time visualization of retina structure and confirm findings.The process is applicable to mouse models of eye diseases, provided the anterior eye portion allows for optical imaging. This includes diabetic retinopathy and retinal ischemia models. These studies lay the foundation for establishing an objective evaluation of neuro damage in humans, which can significantly improve glaucoma diagnosis and treatment in the future.

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Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina  

생쥐 망막의 Ex Vivo 컨포칼 이미징

안락사된 쥐의 눈을 적출하여 방향 감각을 위해 측두부를 표시합니다. 전방을 제거합니다. 그런 다음 수정체와 유리체를 제거하고 아이컵을 파라포름알데히드에 30분 동안 담그십시오.PBS로 아이컵을 30분 동안 씻으십시오. 용액을 세 번 교체합니다. 그런 다음 0.5% Triton X-100으로 30분 동안 세척합니다.차단 완충액에 아이컵을 실온에서 2시간 동안 배양합니다. 면역염색 후 현미경을 사용하여 아이컵에서 망막을 분리합니다. 망막을 4개의 잎으로 나누고 망막 신경절 세포층이 위를 향하도록 평평하게 장착합니다.측두부의 표시가 방향을 위해 부착된 상태로 유지되는지 확인하십시오. 장착 매체로 망막을 덮습니다. 표지 쪽지를 놓습니다.그리고 매니큐어를 사용하여 슬라이드를 밀봉하십시오. 컨포칼 현미경을 켜고 위치 찾기 모드에서 접안렌즈를 사용하여 관심 영역을 찾습니다. 수집 모드로 전환하고 모든 정보 레이어에 대한 Z-Stack 슬라이스와 함께 전체 망막을 덮는 타일을 설정합니다.전체 망막에 걸쳐 최소 25개의 타일을 이미지화하여 전체 볼륨을 얻습니다. Z-Stack 슬라이스를 투영하여 2차원 면형 컨포칼 현미경 이미지를 생성합니다. 복합 vis-OCT 파이버그램을 망막 신경절 축삭돌기에 대해 TuJ1으로 면역염색된 평판 장착 망막의 해당 컨포칼 이미지와 비교합니다.혈관은 공초점 이미지에서 ICAM-2 표지된 혈관과 일치시킬 수 있는 구별 가능한 분지 구조를 나타냅니다. 생체 외 공초점 현미경과 in vivo vis-OCT를 나란히 비교한 결과, 동일한 망막 신경절 축삭 다발 네트워크와 주변 망막 혈관 구조가 밝혀졌습니다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina

Alignment of Visible-Light Optical Coherence Tomography Fibergrams with Confocal Images of the Same Mouse Retina

In recent years, in vivo retinal imaging, which provides non-invasive, real-time, and longitudinal information about biological systems and processes, has ...