Name: Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina
Uploaded: 2023-06-30T13:00:00
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ex vivo confocal imaging of mouse retina

Alineación de Fibergram OCT de Retina de Ratón con Imágenes Confocales

Retinal ganglion cells (RGCs) play a critical role in visual information processing, receiving synaptic inputs through their dendritic trees in the inner plexiform layer (IPL) and transmitting the information via their axons in the retinal nerve fiber layer (RNFL) to the brain1,2,3,4. In diseased conditions such as glaucoma, early RGC degeneration may result in subtle changes in the RNFL, the ganglion cell layer (GCL), the IPL, and the optic nerve in both patients and rodent models5,6,7,8,9. Early detection of these morphological changes in RGCs is thus essential for timely intervention to prevent RGC and vision loss.
We have recently developed a new clinical-ready imaging technology called visible-light optical coherence tomography (vis-OCT) to satisfy the need for in vivo monitoring of RGC damage. Vis-OCT improved the axial resolution, reaching 1.3 &#181;m in the retina10, 11, allowing for the visualization of individual RGC axon bundles in the RNFL. Subsequently, vis-OCT fibergraphy (vis-OCTF) was established to track and quantify RGC damage at the single axon bundle level in mice11,12,13. However, ex vivo confocal imaging of the same retina as the gold standard is often necessary to validate the in vivo findings. Therefore, this study will demonstrate how to align in vivo images acquired by vis-OCTF with ex vivo confocal images of the same mouse retina. The protocol aims to validate the in vivo findings by ex vivo confocal imaging and establish a foundation for examining the molecular and cellular changes underlying RGC damage in diseased conditions.

Autor destacado: Avances en imágenes de retina in vivo y ex vivo para mejorar el diagnóstico y tratamiento del glaucoma 

Alineación de figramas de tomografía de coherencia óptica en luz visible con imágenes confocales de la misma retina de ratón

We present a protocol for aligning in vivo VIS-OCT images with ex vivo immunostained retinal nerve fibers to validate our novel imaging technology. VIS-OCT enables visualization of retinal nerve fibers in vivo, and this process confirms the accuracy of our findings. Our protocol combines in vivo and ex vivo imaging to provide a real time visualization of retina structure and confirm findings.The process is applicable to mouse models of eye diseases, provided the anterior eye portion allows for optical imaging. This includes diabetic retinopathy and retinal ischemia models. These studies lay the foundation for establishing an objective evaluation of neuro damage in humans, which can significantly improve glaucoma diagnosis and treatment in the future.

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Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina  

Imágenes confocales ex vivo de retina de ratón

Enuclear los ojos de un ratón sacrificado, marcando el lado temporal con fines de orientación. Retire la cámara anterior. A continuación, retire el cristalino y el vítreo y coloque las copas oculares en paraformaldehído durante 30 minutos.Lave las copas de los ojos con PBS durante 30 minutos. Reemplazar la solución tres veces. A continuación, lavar con Triton X-100 al 0,5% durante 30 minutos.Incubar las copas oculares en el tampón de bloqueo durante dos horas a temperatura ambiente. Después de la inmunotinción, aísle las retinas de las copas oculares con un microscopio. Divida las retinas en cuatro hojas y móntelas con la capa de células ganglionares de la retina hacia arriba.Asegúrese de que la marca en el lado temporal permanezca adherida para orientarse. Cubra las retinas con medio de montaje. Coloque los cubreobjetos.Y sella las diapositivas con esmalte de uñas. Encienda el microscopio confocal y, en el modo Localizar, busque el área de interés con el ocular. Cambie al modo de adquisición y configure mosaicos para cubrir toda la retina, junto con cortes Z-Stack para todas las capas de información.Visualiza al menos 25 mosaicos en toda la retina para lograr un volumen total. Proyecte los cortes de Z-Stack para generar imágenes bidimensionales de microscopía confocal en la cara. El fitragrama compuesto vis-OCT se compara con la imagen confocal correspondiente de la retina de montaje plano inmunoteñida con TuJ1 para los axones de RGC.Los vasos sanguíneos exhiben estructuras ramificadas distinguibles que pueden coincidir con los vasos sanguíneos marcados con ICAM-2 en la imagen confocal. La comparación lado a lado entre la microscopía confocal ex vivo y la vis-OCT in vivo reveló redes idénticas de haces de axones de RGC y vasculatura retiniana circundante.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina

Alignment of Visible-Light Optical Coherence Tomography Fibergrams with Confocal Images of the Same Mouse Retina

In recent years, in vivo retinal imaging, which provides non-invasive, real-time, and longitudinal information about biological systems and processes, has ...

Investigación

Neurociencias

In Vivo Visible Light Optical Coherence Tomography (OCT) Mouse Retinal Imaging

Tomografía de coherencia óptica (OCT) en luz visible in vivo Imágenes de retina de ratón

Alignment of In Vivo and Ex Vivo Mouse Retinal Images

Alineación de imágenes retinianas de ratón in vivo y ex vivo