Name: Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina
Uploaded: 2023-06-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina at JoVE.com

ex vivo confocal imaging of mouse retina

Mus Retina OCT Fibergram Justering med konfokala bilder

Retinal ganglion cells (RGCs) play a critical role in visual information processing, receiving synaptic inputs through their dendritic trees in the inner plexiform layer (IPL) and transmitting the information via their axons in the retinal nerve fiber layer (RNFL) to the brain1,2,3,4. In diseased conditions such as glaucoma, early RGC degeneration may result in subtle changes in the RNFL, the ganglion cell layer (GCL), the IPL, and the optic nerve in both patients and rodent models5,6,7,8,9. Early detection of these morphological changes in RGCs is thus essential for timely intervention to prevent RGC and vision loss.
We have recently developed a new clinical-ready imaging technology called visible-light optical coherence tomography (vis-OCT) to satisfy the need for in vivo monitoring of RGC damage. Vis-OCT improved the axial resolution, reaching 1.3 &#181;m in the retina10, 11, allowing for the visualization of individual RGC axon bundles in the RNFL. Subsequently, vis-OCT fibergraphy (vis-OCTF) was established to track and quantify RGC damage at the single axon bundle level in mice11,12,13. However, ex vivo confocal imaging of the same retina as the gold standard is often necessary to validate the in vivo findings. Therefore, this study will demonstrate how to align in vivo images acquired by vis-OCTF with ex vivo confocal images of the same mouse retina. The protocol aims to validate the in vivo findings by ex vivo confocal imaging and establish a foundation for examining the molecular and cellular changes underlying RGC damage in diseased conditions.

Författare Spotlight: Framsteg inom in vivo och ex vivo näthinneavbildning för förbättrad diagnos och behandling av glaukom 

Justering av optisk koherenstomografi i synligt ljus med konfokala bilder av samma musnäthinna

We present a protocol for aligning in vivo VIS-OCT images with ex vivo immunostained retinal nerve fibers to validate our novel imaging technology. VIS-OCT enables visualization of retinal nerve fibers in vivo, and this process confirms the accuracy of our findings. Our protocol combines in vivo and ex vivo imaging to provide a real time visualization of retina structure and confirm findings.The process is applicable to mouse models of eye diseases, provided the anterior eye portion allows for optical imaging. This includes diabetic retinopathy and retinal ischemia models. These studies lay the foundation for establishing an objective evaluation of neuro damage in humans, which can significantly improve glaucoma diagnosis and treatment in the future.

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina at JoVE.com

Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina  

Ex vivo konfokal avbildning av musens näthinna

Enukarisera ögonen på en avlivad mus och markera den temporala sidan för orienteringsändamål. Ta bort den främre kammaren. Ta sedan bort linsen och glaskroppen och placera ögonmusslorna i paraformaldehyd i 30 minuter.Tvätta ögonmusslorna med PBS i 30 minuter. Byt ut lösningen tre gånger. Tvätta sedan med 0,5% Triton X-100 i 30 minuter.Inkubera ögonmusslorna i den blockerande bufferten i två timmar i rumstemperatur. Efter immunfärgning, isolera näthinnan från ögonkopparna med hjälp av ett mikroskop. Dela näthinnan i fyra blad och montera dem platt med näthinnans gangliecellskikt uppåt.Se till att märket på den temporala sidan förblir fäst för orientering. Täck näthinnan med monteringsmedium. Placera täckglas.Och försegla objektglasen med nagellack. Slå på konfokalmikroskopet och under lokaliseringsläge, hitta intresseområdet med hjälp av okularet. Växla till förvärvsläge och ställ in brickor för att täcka hela näthinnan, tillsammans med Z-Stack-skivor för alla lager av information.Avbilda minst 25 brickor över hela näthinnan för att uppnå en total volym. Projicera Z-Stack-skivorna för att generera tvådimensionella konfokalmikroskopibilder på ansiktet. Det sammansatta vis-OCT-fibergrammet jämförs med motsvarande konfokalbild av platt monterad näthinna immunfärgad med TuJ1 för RGC-axoner.Blodkärl uppvisar urskiljbara förgreningsstrukturer som kan matchas med de ICAM-2-märkta blodkärlen på konfokalbilden. Jämförelse sida vid sida mellan ex vivo konfokalmikroskopi och in vivo vis-OCT avslöjade identiska RGC-axonknippenätverk och omgivande retinala vaskulaturer.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina

Alignment of Visible-Light Optical Coherence Tomography Fibergrams with Confocal Images of the Same Mouse Retina

In recent years, in vivo retinal imaging, which provides non-invasive, real-time, and longitudinal information about biological systems and processes, has ...