Name: Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina
Uploaded: 2023-06-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina at JoVE.com

ex vivo confocal imaging of mouse retina

Konfokal Görüntülerle Fare Retina OCT Fibergram Hizalaması

Retinal ganglion cells (RGCs) play a critical role in visual information processing, receiving synaptic inputs through their dendritic trees in the inner plexiform layer (IPL) and transmitting the information via their axons in the retinal nerve fiber layer (RNFL) to the brain1,2,3,4. In diseased conditions such as glaucoma, early RGC degeneration may result in subtle changes in the RNFL, the ganglion cell layer (GCL), the IPL, and the optic nerve in both patients and rodent models5,6,7,8,9. Early detection of these morphological changes in RGCs is thus essential for timely intervention to prevent RGC and vision loss.
We have recently developed a new clinical-ready imaging technology called visible-light optical coherence tomography (vis-OCT) to satisfy the need for in vivo monitoring of RGC damage. Vis-OCT improved the axial resolution, reaching 1.3 &#181;m in the retina10, 11, allowing for the visualization of individual RGC axon bundles in the RNFL. Subsequently, vis-OCT fibergraphy (vis-OCTF) was established to track and quantify RGC damage at the single axon bundle level in mice11,12,13. However, ex vivo confocal imaging of the same retina as the gold standard is often necessary to validate the in vivo findings. Therefore, this study will demonstrate how to align in vivo images acquired by vis-OCTF with ex vivo confocal images of the same mouse retina. The protocol aims to validate the in vivo findings by ex vivo confocal imaging and establish a foundation for examining the molecular and cellular changes underlying RGC damage in diseased conditions.

Yazar Spotlight: Gelişmiş Glokom Tanı ve Tedavisi için In Vivo ve Ex Vivo Retinal Görüntülemedeki Gelişmeler 

Görünür Işık Optik Koherens Tomografi Fibergramlarının Aynı Fare Retinasının Konfokal Görüntüleri ile Hizalanması

We present a protocol for aligning in vivo VIS-OCT images with ex vivo immunostained retinal nerve fibers to validate our novel imaging technology. VIS-OCT enables visualization of retinal nerve fibers in vivo, and this process confirms the accuracy of our findings. Our protocol combines in vivo and ex vivo imaging to provide a real time visualization of retina structure and confirm findings.The process is applicable to mouse models of eye diseases, provided the anterior eye portion allows for optical imaging. This includes diabetic retinopathy and retinal ischemia models. These studies lay the foundation for establishing an objective evaluation of neuro damage in humans, which can significantly improve glaucoma diagnosis and treatment in the future.

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina at JoVE.com

Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina  

Fare Retinasının Ex Vivo Konfokal Görüntülemesi

Ötenazi yapılmış bir farenin gözlerini enüklee edin, oryantasyon amacıyla temporal tarafı işaretleyin. Ön kamarayı çıkarın. Ardından lensi ve vitreusu çıkarın ve göz kaplarını 30 dakika boyunca paraformaldehit içine yerleştirin.Göz bardaklarını PBS ile 30 dakika yıkayın. Çözeltiyi üç kez değiştirmek. Daha sonra %0,5 Triton X-100 ile 30 dakika yıkayınız.Göz kaplarını oda sıcaklığında iki saat boyunca bloke edici tamponda inkübe edin. İmmün boyamadan sonra, retinaları bir mikroskop kullanarak göz kapaklarından izole edin. Retinaları dört yaprağa bölün ve retina ganglion hücre tabakası yukarı bakacak şekilde düz bir şekilde monte edin.Yönlendirme için zamansal taraftaki işaretin takılı kaldığından emin olun. Retinaları montaj ortamı ile örtün. Kapak fişlerini yerleştirin.Ve slaytları oje kullanarak kapatın. Konfokal mikroskobu açın ve Konum modu altında, göz merceğini kullanarak ilgilendiğiniz alanı bulun. Alım moduna geçin ve tüm bilgi katmanları için Z-Stack dilimleriyle birlikte tüm retinayı kaplayacak döşemeler ayarlayın.Toplam hacmi elde etmek için tüm retina boyunca en az 25 karo görüntüleyin. İki boyutlu yüz konfokal mikroskopi görüntüleri oluşturmak için Z-Stack dilimlerini yansıtın. Kompozit vis-OCT fibergramı, RGC aksonları için TuJ1 ile immün boyanmış düz monte retinanın karşılık gelen konfokal görüntüsü ile karşılaştırıldı.Kan damarları, konfokal görüntüde ICAM-2 işaretli kan damarları ile eşleştirilebilen ayırt edilebilir dallanma yapıları sergiler. Ex vivo konfokal mikroskopi ve in vivo vis-OKT arasındaki yan yana karşılaştırma, aynı RGC akson demeti ağlarını ve çevresindeki retinal vaskülatürü ortaya çıkardı.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ex Vivo Confocal Imaging of Mouse Retina

Alignment of Visible-Light Optical Coherence Tomography Fibergrams with Confocal Images of the Same Mouse Retina

In recent years, in vivo retinal imaging, which provides non-invasive, real-time, and longitudinal information about biological systems and processes, has ...