لبدء الفحص باستخدام ناهض مستقبلات الصفائح الدموية ، قم بتخفيف كمية مناسبة من مخزون CRPXL في مخزن الفحص إلى تركيز مناسب للحث على أقصى تراكم للصفائح الدموية. سيشار إلى الحل الناتج من الآن فصاعدا باسم المعيار. بعد ذلك ، بدءا من نفس التركيزات الأعلى استعدادا ، قم بإجراء تخفيفات تسلسلية متسلسلة ذات شقين لكل من الكاشف القياسي والاختبار.
قم بإعداد سلسلة تخفيف من ست إلى ثماني نقاط لكل من الاختبار والمعيار في المخزن المؤقت للفحص الذي يولد استجابات تجميع من 100٪ إلى 0٪عندما تكون البلازما الغنية بالصفائح الدموية ، أو PRP ، جاهزة للاستخدام ، أضف حصة من PRP إلى كوفيت قياس تجميع انتقال الضوء. اترك العينات تسخن إلى 37 درجة مئوية في الآبار المحتجزة لبضع دقائق. بمجرد تسخينها بشكل مناسب ، ضع cuvettes في مقياس التجميع لبدء تسجيل الآثار.
مع التحريك المستمر ، أضف الناهض ، وسجل البيانات. قم بجمع البيانات لكل تخفيف معد للمعيار وكاشف الاختبار. استخدم Graphpad Prism ، أو أي حزمة برامج مناسبة ، للتحقق من أن منحنيات التركيز للمعيار والاختبار متوازية.
أدخل البيانات بحيث يحتوي المحور السيني على التركيزات ، ويحتوي المحور ص على الاستجابات المشار إليها إما بالنسبة المئوية للتجميع الأقصى أو المنطقة الواقعة أسفل المنحنى. بعد ذلك ، قم بتحويل قيم التركيز إلى اللوغاريتمات المقابلة ، أو تركيز السجل. حدد الانحدار غير الخطي من وظائف التحليل ، واستخدم المعادلة لتحفيز استجابة الجرعة.
حدد ناهض السجل مقابل منحدر متغير الاستجابة ، واستخدم ملاءمة ثلاثية أو رباعية الاتجاهات ، اعتمادا على الأفضل للبيانات. حدد ما إذا كانت المنحنيات التي تم إنشاؤها متوازية بالنقر فوق علامة التبويب مقارنة ومقارنة مجموعات البيانات. تأكد من أن ميل الاختبار وخطوط التقارب والمنحنيات القياسية متكافئة.
إذا تم استيفاء هذه الشروط ، فتابع حساب الفاعلية ، أو EC50 ، باستخدام تركيب منحنى الانحدار غير الخطي. احسب الفاعلية النسبية بقسمة قيمة EC50 للمعيار على قيمة الاختبار. اضبط الكتلة لكل تركيز حجم لكاشف الاختبار لحساب الفرق في الفاعلية فيما يتعلق بالمعيار.
كشفت آثار تراكم الصفائح الدموية للمعيار وكاشف الاختبار عن الفرق بين استجابتي التجميع. عند 0.075 ميكروغرام لكل ملليلتر ، كانت هناك استجابة واضحة للمعيار ، بينما بالنسبة للاختبار ، لم يظهر التركيز المقابل أي استجابة. تم حساب قيم EC50 للمعيار وكاشف الاختبار عن طريق رسم منحنى استجابة التركيز.