For at starte analysen ved hjælp af trombocytreceptoragonisten, Collagen-Related Peptide Cross-linked eller CRPXL, fortyndes en passende mængde CRPXL-stammen i assaybufferen til en koncentration, der er egnet til at inducere maksimal trombocytaggregation. Den resulterende løsning vil fremover blive benævnt standarden. Derefter udføres sekventielt to gange serielle fortyndinger for både standard- og testreagenset ud fra de samme højeste fremstillede koncentrationer.
Der udarbejdes en seks- til ottepunktsfortyndingsserie for både testen og standarden i analysebufferen, der genererer aggregeringsresponser fra 100 % ned til 0 %Når det trombocytrige plasma, eller PRP, er klar til brug, tilsættes en prøvel PRP i lystransmissionsaggregometrikuvetten. Lad prøverne varme op til 37 grader Celsius i holdehullerne i et par minutter. Når de er korrekt opvarmet, skal du placere kuvetterne i aggregometeret for at begynde at registrere sporene.
Ved konstant omrøring tilsættes agonisten og registreres dataene. Der foretages dataindsamling for hver forberedt fortynding af standarden og testreagenset. Brug Graphpad Prism eller en hvilken som helst passende softwarepakke til at kontrollere, at koncentrationskurverne for standarden og testen er parallelle.
Indtast dataene, således at x-aksen indeholder koncentrationerne, og y-aksen indeholder de reaktioner, der er angivet enten ved procentdelen af maksimal aggregering eller arealet under kurven. Derefter transformeres koncentrationsværdierne til de tilsvarende logaritmer eller logkoncentration. Vælg ikke-lineær regression fra analysefunktionerne, og brug ligningen for dosisresponsstimulering.
Vælg variabel hældning af logagonist versus respons, og brug en tre- eller firevejstilpasning, afhængigt af hvilken der er bedst for dataene. Find ud af, om de genererede kurver er parallelle, ved at klikke på fanen Sammenlign og sammenligne datasættene. Sørg for, at testens hældning og asymptoter og standardkurverne er ækvivalente.
Hvis disse betingelser er opfyldt, skal du fortsætte med at beregne styrken eller EC50 ved hjælp af ikke-lineær regressionskurvetilpasning. Den relative styrke beregnes ved at dividere standardens EC50-værdi med prøvningens. Reagensets massekoncentration pr. volumen justeres for at tage højde for forskellen i styrke i forhold til standarden.
Trombocytaggregationssporene for standarden og testreagenset afslørede forskellen mellem de to aggregeringsresponser. Ved 0,075 mikrogram pr. milliliter var der et klart svar på standarden, mens den tilsvarende koncentration for testen ikke viste noget svar. EC50-værdierne for standarden og testreagenset blev beregnet ved at plotte koncentrationsresponskurven.
