Om de test te starten met behulp van de bloedplaatjesreceptoragonist, Collageen-Related Peptide Cross-Linked of CRPXL, verdunt u een geschikte hoeveelheid van de CRPXL-voorraad in de testbuffer tot een concentratie die geschikt is om maximale bloedplaatjesaggregatie te induceren. De resulterende oplossing wordt voortaan de standaard genoemd. Voer vervolgens, uitgaande van dezelfde hoogste bereide concentraties, achtereenvolgens tweevoudige seriële verdunningen uit voor zowel het standaard- als het testreagens.
Bereid een zes- tot achtpunts verdunningsreeks voor zowel de test als de standaard in de testbuffer voor die aggregatieresponsen genereert van 100% tot 0%Wanneer het bloedplaatjesrijke plasma, of PRP, klaar is voor gebruik, voegt u een aliquot PRP toe aan de lichttransmissie-aggregometriecuvet. Laat de monsters een paar minuten opwarmen tot 37 graden Celsius in de wachtputten. Eenmaal op de juiste manier opgewarmd, plaatst u de cuvetten in de aggregometer om te beginnen met het registreren van de sporen.
Voeg onder voortdurend roeren de agonist toe en noteer de gegevens. Voer gegevensverzameling uit voor elke bereide verdunning van de standaard en het testreagens. Gebruik Graphpad Prism, of een ander geschikt softwarepakket, om te controleren of de concentratiecurven voor de standaard en test parallel zijn.
Voer de gegevens zodanig in dat de x-as de concentraties bevat en de y-as de antwoorden die worden aangegeven door het percentage maximale aggregatie of het gebied onder de curve. Transformeer vervolgens de concentratiewaarden naar de bijbehorende logaritmen, of logconcentratie. Selecteer niet-lineaire regressie uit de analysefuncties en gebruik de vergelijking voor dosis-responsstimulatie.
Selecteer log-agonist versus responsvariabele helling en gebruik een drie- of viervoudige pasvorm, afhankelijk van wat het beste is voor de gegevens. Bepaal of de gegenereerde curven parallel zijn door op het tabblad Vergelijken te klikken en de gegevenssets te vergelijken. Zorg ervoor dat de helling en asymptoten van de test en de standaardcurven gelijkwaardig zijn.
Als aan deze voorwaarden is voldaan, gaat u verder met het berekenen van de potentie, of EC50, met behulp van niet-lineaire regressiecurve-aanpassing. Bereken de relatieve potentie door de EC50-waarde van de standaard te delen door die van de test. Pas de massa per volumeconcentratie van het testreagens aan om rekening te houden met het verschil in potentie ten opzichte van de standaard.
De bloedplaatjesaggregatiesporen voor de standaard en het testreagens onthulden het verschil tussen de twee aggregatieresponsen. Bij 0,075 microgram per milliliter was er een duidelijke respons op de norm, terwijl voor de test de overeenkomstige concentratie geen respons vertoonde. De EC50-waarden van het standaard- en testreagens werden berekend door de concentratieresponscurve uit te zetten.