혈소판 수용체 작용제, 콜라겐 관련 펩타이드 가교 또는 CRPXL을 사용하여 분석을 시작하려면 분석 완충액의 CRPXL 스톡을 최대 혈소판 응집을 유도하기에 적합한 농도로 희석합니다. 결과 솔루션을 이후 표준이라고 합니다. 다음으로, 동일한 최고 농도의 준비에서 시작하여 표준물질과 테스트 시약 모두에 대해 순차적으로 2배 연속 희석을 수행합니다.
100%에서 0%까지 응집 반응을 생성하는 분석 완충액에서 테스트 및 표준물질 모두에 대해 6-8점 희석 시리즈를 준비합니다혈소판이 풍부한 혈장(PRP)을 사용할 준비가 되면 광 투과 응집체 큐벳에 PRP 부분 표본을 추가합니다. 샘플을 홀딩 웰에서 섭씨 37도까지 몇 분 동안 데우십시오. 적절하게 예열되면 큐벳을 집적기에 배치하여 트레이스 기록을 시작합니다.
일정하게 저어주면서 작용제를 추가하고 데이터를 기록합니다. 표준물질 및 테스트 시약의 준비된 각 희석액에 대한 데이터 수집을 수행합니다. Graphpad Prism 또는 적절한 소프트웨어 패키지를 사용하여 표준물질과 검정의 농도 곡선이 평행한지 확인하십시오.
x-축에 농도가 포함되고 y-축에 최대 집계 백분율 또는 곡선 아래 면적으로 표시되는 반응이 포함되도록 데이터를 입력합니다. 다음으로, 농도 값을 대응하는 로그 또는 로그 농도로 변환합니다. 분석 함수에서 비선형 회귀를 선택하고 도스 반응 자극에 대한 방정식을 사용합니다.
로그 작용제 대 반응 변수 기울기를 선택하고, 데이터에 가장 적합한 3방향 또는 4방향 피팅을 사용합니다. 생성된 곡선이 평행한지 확인하려면 비교 탭을 클릭하고 데이터셋을 비교합니다. 검정의 기울기와 점근선, 표준 곡선이 동일한지 확인합니다.
이러한 조건이 충족되면 비선형 회귀 곡선 피팅을 사용하여 효능 또는 EC50 계산을 진행합니다. 표준물질의 EC50 값을 테스트의 값으로 나누어 상대 효능을 계산합니다. 표준물질에 대한 효능의 차이를 설명하기 위해 테스트 시약의 부피 농도당 질량을 조정합니다.
표준물질과 검사 시약에 대한 혈소판 응집 추적은 두 응집 반응 간의 차이를 나타냈습니다. 밀리리터당 0.075마이크로그램에서는 표준물질에 대한 명확한 반응이 나타났지만, 테스트에서는 해당 농도가 반응하지 않았습니다. 표준물질 및 시험 시약의 EC50 값은 농도 반응 곡선을 플로팅하여 계산하였다.