For å starte analysen ved bruk av blodplatereseptoragonist, kollagenrelatert peptid tverrbundet, eller CRPXL, fortynn en passende mengde av CRPXL-stammen i analysebufferen til en konsentrasjon som er egnet til å indusere maksimal blodplateaggregering. Den resulterende løsningen vil heretter bli referert til som standarden. Neste, med utgangspunkt i de samme høyeste forberedte konsentrasjonene, utfører sekvensielt to ganger serielle fortynninger for både standard- og testreagenset.
Forbered en fortynningsserie på seks til åtte punkter for både testen og standarden i analysebufferen som genererer aggregeringsresponser fra 100 % ned til 0 %Når det blodplaterike plasmaet, eller PRP, er klart til bruk, tilsett en alikot av PRP i den lette transmisjonsaggregometri-kuvetten. La prøvene varme til 37 grader Celsius i holdebrønnene i et par minutter. Når de er riktig oppvarmet, plasser kyvettene i aggregometeret for å begynne å registrere sporene.
Med konstant omrøring, legg til agonisten og registrer dataene. Utfør datainnsamling for hver tilberedt fortynning av standarden og testreagenset. Bruk Graphpad Prism, eller en hvilken som helst passende programvarepakke, for å kontrollere at konsentrasjonskurvene for standarden og testen er parallelle.
Skriv inn dataene slik at x-aksen inneholder konsentrasjonene, og y-aksen inneholder svarene som indikeres av enten prosentandelen av maksimal aggregering eller området under kurven. Deretter transformerer du konsentrasjonsverdiene til de tilsvarende logaritmene, eller loggkonsentrasjonen. Velg ikke-lineær regresjon fra analysefunksjonene, og bruk ligningen for doseresponsstimulering.
Velg log agonist versus response variable slope, og bruk en tre- eller fireveis tilpasning, avhengig av hvilken som er best for dataene. Finn ut om kurvene som genereres, er parallelle ved å klikke kategorien Sammenlign og sammenligne datasettene. Sørg for at stigningstallet og asymptotene i testen, og standardkurvene, er likeverdige.
Hvis disse betingelsene er oppfylt, fortsett å beregne potens, eller EC50, ved hjelp av ikke-lineær regresjonskurvetilpasning. Beregn den relative styrken ved å dele EC50-verdien av standarden med testen. Juster massen per volumkonsentrasjon av testreagenset for å ta hensyn til forskjellen i potens i forhold til standarden.
Plateaggregasjonssporene for standarden og testreagenset viste forskjellen mellom de to aggregeringsresponsene. Ved 0, 075 mikrogram per milliliter var det et klart svar på standarden, mens den tilsvarende konsentrasjonen for testen ikke viste noen respons. EC50-verdiene for standard- og testreagenset ble beregnet ved å plotte konsentrasjonsresponskurven.