För att påbörja analysen med trombocytreceptoragonisten, Collagen-Related Peptide Cross-Linked eller CRPXL, späd en lämplig mängd av CRPXL-stammen i analysbufferten till en koncentration som är lämplig för att inducera maximal trombocytaggregation. Den resulterande lösningen kommer hädanefter att kallas standard. Utgå därefter från samma högsta beredda koncentrationer och utför sekventiellt tvåfaldiga serieutspädningar för både standardreagenset och testreagenset.
Förbered en utspädningsserie med sex till åtta punkter för både testet och standarden i analysbufferten som genererar aggregeringssvar från 100 % ner till 0 %När den trombocytrika plasman, eller PRP, är klar att användas, tillsätt en alikvot PRP i ljustransmissionsaggregometrikyvetten. Låt proverna värmas upp till 37 grader Celsius i förvaringsbrunnarna i ett par minuter. När kyvetterna har värmts upp på lämpligt sätt placerar du dem i aggregometern för att börja registrera spåren.
Tillsätt agonisten under ständig omrörning och registrera data. Utför datainsamling för varje beredd utspädning av standarden och testreagensen. Använd Graphpad Prism, eller något lämpligt mjukvarupaket, för att kontrollera att koncentrationskurvorna för standard och test är parallella.
Ange data så att x-axeln innehåller koncentrationerna och y-axeln innehåller de svar som anges antingen av den procentuella andelen av den maximala aggregeringen eller arean under kurvan. Omvandla sedan koncentrationsvärdena till motsvarande logaritmer, eller logaritmiska koncentration. Välj icke-linjär regression från analysfunktionerna och använd ekvationen för dos-responsstimulering.
Välj logagonist kontra responsvariabel lutning och använd en tre- eller fyrvägspassning, beroende på vilket som är bäst för data. Ta reda på om de kurvor som genereras är parallella genom att klicka på fliken Jämför och jämföra datauppsättningarna. Se till att lutningen och asymptoterna i testet, och standardkurvorna, är likvärdiga.
Om dessa villkor är uppfyllda, fortsätt med att beräkna potensen, eller EC50, med hjälp av icke-linjär regressionskurva. Beräkna den relativa styrkan genom att dividera EC50-värdet för standarden med värdet för testet. Justera massan per volymkoncentration av testreagenset för att ta hänsyn till skillnaden i styrka i förhållande till standarden.
Trombocytaggregationsspåren för standarden och testreagenset avslöjade skillnaden mellan de två aggregeringsresponserna. Vid 0,075 mikrogram per milliliter fanns det ett tydligt svar på standarden, medan motsvarande koncentration inte visade något svar för testet. EC50-värdena för standard- och testreagenset beräknades genom att kurvan för koncentrationsrespons plottades.