マウスに麻酔をかけた後、マウスの片方の足をそっとつまんで、マウスに適切に麻酔がかけられているかどうかを確認します。1%トロピカミド点眼液を投与してマウスの眼球を拡張し、30秒間待ちます。次に、眼球運動とまばたきを減らすために、両目に0.5%プロパラカイン塩酸塩の滴を塗布し、潤滑剤のアイジェルを滴下し、マウスを加熱水パッドに置きます。
等量のインドシアニングリーン(ICG)とフルオレセイン色素を含む色素混合物を調製します。250マイクロリットルの混合物を腹腔内注射でマウスの後ろ脚近くの左下象限に注入し、臓器の穿孔を防ぐために皮膚と平行に配置します。プランジャーを慎重に引っ込め、シリンジキャップに血液が入っていないことを確認します。
一定のペースで染料を徐々に注入しながら進めます。次に、イメージングプラットフォームの加熱パッドにマウスを置きます。マウス本体の位置をカメラに対して45度の角度で調整し、頭を少し下にゆっくりと傾けます。
綿棒を使用して画像化する目を繊細に拭き取り、潤滑剤の点眼薬またはジェルの層を取り除きます。カメラをマウスの目に向けて移動させ、アクイジションモジュールからFAチャンネルを選択します。視神経が画面の中心に来るようにマウスの頭を配置し、レーザー走査型検眼鏡を傾ける必要がないようにします。
次に、アクイジションモジュールのICGAチャンネルに切り替えます。イメージングソフトウェアで目が画面全体を占めたら、画像取得モジュールの丸い黒いボタンを回して画像感度を調整します。検眼鏡のノブを使用して焦点を微調整します。
次に、取得モジュールの丸い黒いボタンを押して、画像を正規化します。正規化後、タッチスクリーンパネルのACQUIREボタンをクリックして画像を保存します。取得モジュールを使用してFAチャネルに切り替え、前述のように各画像の感度と焦点の両方を調整して、脈絡膜新生血管またはCNV病変の漏出をキャプチャします。
次に、注入後3〜4分でICGAおよびFAの初期段階の画像を撮影します。必要な画像がすべてキャプチャされたら、ゲル潤滑剤または軟膏をマウスの目に塗布します。毛細血管CNVは、若いマウスのCNV病変を支配しています。
対照的に、老齢マウスは、大口径血管、血管ループ、および吻合部接続を特徴とする細動脈CNVを示します。若齢マウスと老齢マウスの両方で網膜血管系の明瞭な視認性が示され、若いマウスのICGA画像 FA.In、網膜血管系は見えず、脈絡膜血管は色あせて見える。高齢マウスのICGA画像では、脈絡膜血管が薄色しているように見える一方で、部分的な網膜血管系が観察されます。
高齢マウスの細動脈CNVは、若齢マウスの毛細血管CNVと比較して、CNVサイズが大きく、漏出が有意に多い。