멸균 폴리스티렌 12웰 플레이트의 각 웰에 박테리아 접종물 1밀리리터를 추가하는 것으로 시작합니다. 접시를 섭씨 25도에서 24시간 동안 배양합니다. 그런 다음 피펫을 사용하여 상층액을 제거합니다.
1.5ml의 멸균 인산염 완충 식염수 또는 PBS를 각 웰에 조심스럽게 추가하고 다시 피펫으로 상층액을 제거합니다. 각 웰에 1밀리리터의 멸균 PBS를 한 번 더 추가한 후 장착된 셀 스크레이퍼를 사용하여 웰의 바닥과 벽 표면을 긁어냅니다. 채취한 세포 현탁액을 9밀리리터의 식염수와 10-20개의 유리 구슬이 들어 있는 음성 튜브에 10으로 표시된 멸균 플라스틱 튜브로 옮깁니다.
최대 속도로 60초 동안 튜브를 소용돌이칩니다. 다음으로, 1 밀리리터의 셀 현탁액을 이전 튜브에서 10으로 표시된 다른 멸균 튜브로 옮기고 9 밀리리터의 식염수를 함유하는 음극 2로 옮겨 10 배 연속 희석을 수행합니다. 튜브 10에서 음의 7까지 연속 희석 과정을 계속하십시오.
각 희석액에서 100 마이크로리터를 별도의 아시네토박터 한천 플레이트에 펴 바릅니다. 한천 플레이트를 섭씨 30도에서 24-42시간 동안 배양합니다. 그런 다음 10에서 250 사이의 범위 내에 있는 것을 고려하여 각 플레이트의 일반적인 빨간색 콜로니 수를 수동으로 계산합니다.
A.bouvetii를 제외한 모든 아시네토박터 분리물은 생물막에서 웰 당 7-8개의 로그 CFU에 해당하는 세포를 가지고 있었습니다. A.bouvetii는 4.4 Log CFU에서 훨씬 더 낮은 세포 수를 가졌습니다.