3.5 मिलीमीटर व्यास की बायोप्सी पंच तैयार करके शुरू करें। पंच शाफ्ट पर एक बिंदु चिह्नित करें, किनारे से पांच मिलीमीटर दूर। पंच को सुरक्षित करें और शाफ्ट के चिह्नित डिस्टल सेक्शन को अलग करने के लिए दो स्पीड रोटरी टूल का उपयोग करें।
शाफ्ट को 3.5 मिलीमीटर की गहराई पर काटें, अंतिम 1.5 मिलीमीटर संलग्न छोड़ दें, और टिप को 90 डिग्री तक मोड़ें। अगला, आसुत जल के 900 मिलीलीटर में पीबीएस तैयार और 7.4 पीएच समायोजित. फिर आसुत जल जोड़कर समाधान को एक लीटर की अंतिम मात्रा में लाएं।
एक रासायनिक हुड के तहत पीबीएस के 45 मिलीलीटर में पैराफॉर्म एल्डिहाइड के दो ग्राम को भंग करके 4% पैराफॉर्म एल्डिहाइड समाधान तैयार करें और पीएच को 7.4 में समायोजित करते हुए इसे 65 डिग्री सेल्सियस तक गर्म करें। एक बार जब पैराफॉर्म एल्डिहाइड पूरी तरह से भंग हो जाता है, तो समाधान की अंतिम मात्रा को 50 मिलीलीटर तक समायोजित करें। प्रशासन के लिए इंजेक्शन संवेदनाहारी कॉकटेल की सही मात्रा निर्धारित करने के लिए माउस वजन.
एक बार संज्ञाहरण प्रशासित है, शल्य चिकित्सा मेज पर माउस स्थिति, मानक कृंतक सर्जरी सिद्धांतों का पालन. फिर पार्श्व डिकुबिटस स्थिति में कृंतक के सिर के नीचे पांच मिलीमीटर ऊंचा तकिया रखें। सर्जिकल आई स्पीयर से ओकुलर सतह को अच्छी तरह से सुखाएं और पलकों को बड़े करीने से ट्रिम करें।
संवेदनाहारी माउस का एक इष्टतम दृश्य के लिए शल्य चिकित्सा माइक्रोस्कोप समायोजित करें और 30 सेकंड के लिए टाइमर सेट. फिर सर्जिकल माइक्रोस्कोप का उपयोग करके लिम्बल क्षेत्र परिधि की जांच करें, जबकि अंगूठे और तर्जनी का उपयोग करके माउस की पलकें चौड़ी खुली रखें। अब ध्यान से नीचे की ओर दबाव लागू किए बिना आंखों की धुरी के समानांतर निष्फल पंच ट्रेफिन पकड़ो।
उपकरण को घुमाने से बचें और पंच ट्रेफिन की धुरी को ग्लोब की धुरी के समानांतर बनाए रखें। पंच ट्रेफिन छेद में सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान की तीन बूंदों को रखने के लिए सर्जिकल सहायक से पूछें। 30 सेकंड के बाद, पीबीएस के पांच मिलीलीटर का उपयोग कॉर्निया और fornix साफ.
फिर घायल आंख की कॉर्नियल सतह पर सात और 7.5 के बीच पीएच मान सुनिश्चित करने के लिए एक सार्वभौमिक पीएच संकेतक पेपर का उपयोग करें। प्रक्रिया के बाद, धोने, सूखी और 70% इथेनॉल के साथ पंच ट्रेफिन और शल्य चिकित्सा तालिका सैनिटाइज. एक भट्ठा दीपक जैव माइक्रोस्कोप के तहत एक संवेदनाहारी माउस की आंखों की जांच करें और छवियों को पकड़ने के लिए एक कैमरे का उपयोग करें।
फिर 0.1% फ्लोरोसेंट आईड्रॉप्स लागू करें और कपास आवेदक के साथ किसी भी अतिरिक्त फ्लोरोसेंट तरल को भिगोएँ। कोबाल्ट ब्लू फिल्टर का उपयोग करके कॉर्नियल उपकला दोषों की संभावित उपस्थिति का मूल्यांकन करें और तस्वीरें लें। बाद में, क्षतिग्रस्त ओकुलर सतह पर ट्रिपल एंटीबायोटिक नेत्र मरहम लागू करें।
औसत दर्जे का caruncle और पूरे palpable कंजाक्तिवा संरक्षण करते हुए आंख nucleate. एक शल्य माइक्रोस्कोप के तहत, नाजुक caruncle और त्वचा के बीच जंक्शन काटना. दांत संदंश का प्रयोग, caruncle वापस लेने और palpable कंजाक्तिवा के नीचे शल्य कैंची गाइड मदद, tarsal थाली के साथ अपने जंक्शन की ओर बढ़.
पार्श्व कैंथस की ओर आसंजन रेखा के साथ कंजाक्तिवा को काटें। फिर सर्जिकल कैंची को कंजाक्तिवा के जंक्शन पर और सबकंजंक्टिवल प्लेन पर अवर टार्सल प्लेट में बदल दें। अब अंगूठे और तर्जनी का उपयोग करके नाक की तरफ से बेहतर और अवर पलकों को वापस लें।
जबकि वापस लेने के लिए, फैला हुआ लैक्रिमल ग्रंथि के पीछे घुमावदार टिप चिमटी की नोक गाइड, ऑप्टिक तंत्रिका की ओर बढ़ रहा है. ऑप्टिक तंत्रिका को मजबूती से समझें और ग्लोब निकालें। बाद में, पीबीएस के साथ ग्लोब कुल्ला और निर्धारण समाधान में यह हस्तांतरण.
माउस मॉडल में कॉर्नियल और लिम्बल क्षार की चोट के बाद माउस आंख की घाव भरने की प्रक्रिया को दिखाया गया है। कॉर्नियल एडिमा शून्य और दो दिनों में प्रमुख है, जबकि फाइब्रोसिस दूसरे सप्ताह के बाद चोट के दौरान अधिक स्पष्ट है। उपकला दोष 12 से 14 दिनों में एक केन्द्रापसारक पैटर्न में नेत्रश्लेष्मला उपकला कोशिका प्रवास द्वारा ठीक हो जाता है।
हालांकि, घायल आंखों में से 50% ने दूसरे सप्ताह के अंत में लगातार उपकला दोष विकसित किए।
