直径3.5ミリメートルの生検パンチを準備することから始めます。エッジから5ミリメートル離れたパンチシャフト上のポイントをマークします。パンチを固定し、2速の回転工具を使用して、シャフトのマークされた遠位部分を切断します。
シャフトを3.5ミリの深さでカットし、最後の1.5ミリを付いたまま、先端を90度に曲げます。次に、900ミリリットルの蒸留水でPBSを調製し、pHを7.4に調整します。次に、蒸留水を加えて溶液を1リットルの最終容量にします。
2グラムのパラホルムアルデヒドを45ミリリットルのPBSに溶解して4%パラホルムアルデヒド溶液を調製し、pHを7.4に調整しながら摂氏65度に加熱します。パラホルムアルデヒドが完全に溶解したら、溶液の最終容量を50ミリリットルに調整します。マウスの重量を量って、投与用の注射用麻酔薬カクテルの正しい量を決定します。.
麻酔が投与されたら、標準的なげっ歯類の手術の原則に従って、マウスを手術台に置きます。次に、高さ5ミリの枕をげっ歯類の頭の下に横褥位の位置に置きます。外科用アイスピアーで眼球表面を完全に乾かし、まつげをきれいにトリミングします。
麻酔をかけたマウスが最適に見えるように手術用顕微鏡を調整し、タイマーを30秒に設定します。次に、親指と人差し指でマウスのまぶたを大きく開いたまま、手術用顕微鏡を使用して辺縁部の周囲を調べます。次に、滅菌したパンチトレフィンを下向きの圧力をかけずに、目の軸と平行に慎重に保持します。
計器の回転を避け、パンチトレフィンの軸を地球の軸と平行に保ちます。外科助手に、パンチトレフィンの穴に水酸化ナトリウム溶液を3滴入れるように依頼します。30秒後、5ミリリットルのPBSを使用して角膜と円蓋を洗浄します。
次に、ユニバーサルpHインジケーターペーパーを使用して、負傷した目の角膜表面のpH値が7〜7.5になるようにします。処置後、パンチトレフィンと手術台を70%エタノールで洗浄、乾燥、消毒します。麻酔をかけたマウスの目を細隙灯のバイオ顕微鏡で観察し、カメラで撮影します。
次に、0.1%の蛍光点眼薬を塗布し、余分な蛍光液を綿アプリケーターに浸します。コバルトブルーフィルターを使用して角膜上皮欠損の可能性を評価し、写真を撮ります。その後、損傷した眼の表面に三重の抗生物質点眼軟膏を塗布します。
内側心細胞と触知可能な結膜全体を維持しながら、眼球を核化します。手術用顕微鏡で、カルアンクルと皮膚の接合部を繊細に解剖します。歯の鉗子を使用して、手根骨を引っ込め、触知可能な結膜の下に外科用ハサミを誘導し、足根板との接合部に向かいます。
癒着線に沿って結膜を外側カンサスに向かって切断します。次に、結膜下面の結膜と下足根板の接合部に外科用ハサミを回します。次に、親指と人差し指を使用して、上まぶたと下まぶたを鼻側から引っ込めます。
引っ込みながら、湾曲した先端ピンセットの先端を突出した涙腺の後ろに導き、視神経に向かって移動させます。視神経をしっかりと掴み、球体を抜出します。その後、グローブをPBSで洗い流し、固定液に移します。
角膜および辺縁のアルカリ損傷後のマウス眼の創傷治癒過程をマウスモデルで示す。角膜浮腫は0日目と2日目に顕著ですが、線維化は受傷後2週間に顕著です。上皮欠損は、12〜14日で求心性パターンでの結膜上皮細胞の移動によって治癒しました。
しかし、負傷した眼の50%は、2週目の終わりに持続的な上皮欠損を発症しました。
