교반 탱크 바이오리액터 용기에서 바이오리액터 컨트롤러의 온도 pH 및 DO 제어를 일시적으로 중지하고 용기의 모든 PBS를 폐기물 병으로 완전히 분배합니다. 일회용 여과 모듈을 10리터 일회용 보관 백의 포트에 용접합니다. 세럼이 없는 완전한 MSC 배지를 여과하여 보관 백에 옮깁니다.
펌프를 한 속도 300RPM으로 설정합니다. 그리고 피드 백에서 용기로 1리터의 배지를 분배합니다. 펌프를 멈춥니다.
그리고 온도 pH를 시작하고 제조업체의 지침에 따라 다시 DO에 용해시킵니다. 피드백을 공급 튜브에 연결하는 튜브를 밀봉하고 분리합니다. 분산된 마이크로 캐리어 병에서 공급 튜브로 튜브를 용접합니다.
그리고 병의 모든 내용물을 용기로 펌핑합니다. 다음으로, 혈청이 없는 배지에서 8개의 HMC에 2.5배 10을 다시 현탁시키고 이전에 마이크로 캐리어 현탁액을 담았던 빈 병으로 옮깁니다. 병 안에 총 500mL의 혈청이 없는 배지를 넣고 셀 현탁액을 섞습니다.
병의 모든 내용물을 용기에 펌핑합니다. 병을 피드 튜브에 연결하는 튜브를 밀봉하고 분리한 다음 피드 백을 다시 용접합니다. 컨트롤러의 교반 설정을 조정하여 마이크로 캐리어에 대한 세포 접종을 시작합니다.
그리고 자동화된 매체 보충 및 교환 체제를 설정하십시오. 일회용 샘플링 백을 샘플링 튜브에 용접합니다. 그리고 원하는 시점에 샘플을 수집합니다.
컨트롤러에서 셀 수확 시 마이크로 캐리어가 정착되도록 교반 속도를 0으로 설정합니다. 그리고 상층액을 공급 체제에 분배하여 용기에 약 1리터의 배양 현탁액을 남깁니다. 희석을 위해 50ml의 갓 준비된 분해액이 들어 있는 백을 500ml의 HBSS에 용접합니다.
그리고 공급 튜브를 통해 모든 용액을 용기로 펌핑합니다. 교반 속도를 40에서 45RPM 사이로 설정하여 마이크로 캐리어를 용해시킵니다. 마이크로 캐리어가 40-60분 이내에 용해된 후 일회용 3리터 저장 백을 수확 튜브에 용접하고 셀 현탁액을 완전히 펌핑합니다.
세포 채취 중에 세포 처리 시스템을 켭니다. 그리고 제조업체의 지침에 따라 기기에 일회용 셀 처리 키트를 설치합니다. 셀 현탁액, 세척 완충액 및 배양 배지의 백을 키트에 용접합니다.
작동 매개변수를 입력하고 자동 세척 및 재현탁 프로세스를 시작합니다. 세포 밀도 계산을 위해 세포 처리 시스템에 표시된 대로 원심분리기 챔버에서 세포 샘플을 수집합니다. 계수 후 완전한 무혈청 배지를 사용하여 세포 밀도를 밀리리터당 6개의 세포로 2배 10으로 재조정합니다.
15리터 바이오리액터에서 세포 제형 공정의 경우, 제형 완충액을 사용하여 수확된 세포를 재현탁시킵니다. 250mL의 재부유 셀을 셀 충전재에 용접합니다. 일회용 충전 및 마감 소모품 키트를 셀 충전 시스템에 조립합니다.
그리고 셀을 다시 매달기 전에 제조업체의 지침에 따라 사전 냉각 시스템을 켭니다. 시스템의 지침에 따라 세트당 총 30개의 봉지로 봉지당 20밀리리터를 채우도록 설정합니다. 새로운 20개의 극저온 보존 백 세트를 일회용 충전 및 마감 소모품 키트에 용접하고 모든 셀이 할당될 때까지 충전 및 마무리를 반복합니다.
hMSC의 경우, 90% 이상의 세포 생존율에서 누적 128배 확장이 달성되었으며포도당 섭취량은 세포 확장과 음의 상관관계를 나타내어 건강한 세포 성장과 관련된 신진대사를 보여주었습니다. 갓 수확한 MSC는 양성 마커의 경우 95% 이상, 음성 마커의 경우 2% 미만의 발현으로 고전적인 표현형 마커를 유지합니다. 극저온 보존된 셀은 우수한 접착력, 정상 팽창 거동 및 2D 플라스크에 해동 및 재도금 후 나선형 성장을 동반한 전형적인 스핀들 모양을 보여주었습니다.
게다가, 세포는 또한 osteogenic, adipogenic 및 chondrogenic 계통으로 분화하는 그들의 기능을 유지했습니다. 이 플랫폼은 HEK293T 및 Vero 세포와 같은 다른 앵커리지 의존성 세포를 배양하는 데에도 채택할 수 있습니다. 15리터 바이오리액터에서 B2B 전달 공정 후, HEK293T 세포는 밀리리터당 7개 세포의 10배인 1.68배의 피크 세포 농도에 도달했습니다.
Vero 세포는 7 개의 세포에 1.08 곱하기 10의 농도에 도달했습니다. 두 세포 유형 모두 높은 생존율을 유지했습니다.
