창공된 필름 면이 위를 향하도록 청소한 그리드를 젖은 압지 위로 옮깁니다. 물 장력으로 인한 구부러짐을 방지하기 위해 소수성 그리드를 물에 수직으로 담그십시오. 잠긴 그리드를 정사각형 배열로 정렬하여 가깝게 유지하되 겹치지 않도록 합니다.
그리드 코팅 트러프를 더 많은 탈이온수로 채우고 수면이 그리드에서 최소 5mm 위에 있도록 합니다. 접시에서 MMA 그래핀 필름을 퍼내려면 그래핀 필름에서 약간 떨어진 비스듬히 커버 슬립을 접시 안으로 천천히 내립니다. 커버 슬립을 그래핀 MMA 시트 아래에 놓고 가장자리를 시트와 평행하게 맞춥니다.
그런 다음 커버 슬립을 물에서 수직으로 들어 올려 MMA 그래핀 필름을 가져옵니다. 커버 슬립을 물 속으로 45도 각도로 내려 MMA 그래핀 필름을 트로프로 옮기면 필름이 커버 슬립에서 분리되어 수면에 뜨게 됩니다. 수위가 낮아지기 전에 MMA 그래핀 필름을 그리드 위에 놓습니다.
팁이 녹아 닫힌 파스퇴르 피펫을 사용하여 MMA 그래핀 필름의 위치를 조심스럽게 조작합니다. 주사기를 사용하여 MMA 그래핀 필름이 그리드에 완벽하게 떨어지고 표면을 완전히 덮을 수 있도록 수위를 천천히 낮춥니다. 깨끗하고 마른 핀셋을 사용하여 그리드를 고정하는 압지를 들어 올려 깨끗하고 먼지가 없는 페트리 접시에 놓습니다.
클램핑 TEM 그리드 홀더 블록의 베이스를 200밀리리터의 신선한 아세톤이 들어 있는 첫 번째 결정화 접시의 바닥에 놓습니다. 개별적으로 MMA 면이 압지에서 위를 향하도록 각 그리드를 그리드 홀더 블록의 웰로 옮깁니다. 접시를 호일로 덮고 오비탈 셰이커에서 30분 동안 부드럽게 흔듭니다.
그리드 홀더 블록에 금속 뚜껑을 놓아 그리드를 고정합니다. 그런 다음 구부러진 포크나 긴 핀셋을 사용하여 접시에서 블록을 조심스럽게 들어 올려 200ml의 신선한 아세톤이 들어 있는 두 번째 접시의 바닥에 놓습니다. 블록에서 뚜껑을 제거한 후 오비탈 셰이커에 올려 30분 동안 부드럽게 흔듭니다.
그리드 홀더 블록에 뚜껑을 다시 놓고 200ml의 이소프로필 알코올이 들어 있는 접시에 옮깁니다. 뚜껑을 제거한 후 20분 동안 부드럽게 흔듭니다. 그리드를 압지로 덮인 작은 유리 페트리 접시에 옮기고 그리드를 10분 동안 자연 건조시킵니다.
TEM 회절 모드에서 그래핀 단층으로 덮인 EM 그리드는 그래핀의 육각형 격자에 해당하는 브래그 피크를 보여줍니다. 그래핀 그리드는 그래핀 지지체가 있는 경우와 없는 경우 거룩한 금 그리드에 적용된 아포페리틴을 비교할 때 관찰되는 바와 같이 샘플에 집중 효과가 있습니다. 그래핀으로 덮인 금 격자에 있는 아포페리틴의 CryoEM 현미경 사진의 빠른 푸리에 변환은 육각형 그래핀 격자에 해당하는 브래그 피크를 보여주었습니다.