Per iniziare, prepara la piattaforma chirurgica in una stanza con un'area del banco di 60 centimetri per 60 centimetri per l'operazione. Pulire la superficie con alcool al 70% e coprirla con un asciugamano medico monouso. Quindi, disinfettare l'area con radiazioni ultraviolette per 30 minuti.
Acclimatare una femmina di topo C57 nero/6 di otto settimane alla struttura di stabulazione per una settimana prima dell'intervento chirurgico. Usando un batuffolo di cotone pulito, applicare la lozione depilatoria sul retro del topo anestetizzato. Dopo tre-cinque minuti, rimuovere i peli utilizzando garze e cotton fioc.
Successivamente, pulisci la pelle con etanolo al 70%. Fissare il mouse sulla piattaforma chirurgica con la schiena rivolta verso l'alto utilizzando una striscia di gomma o una corda di cotone e applicare una soluzione di iodoforo per pulire la schiena. Per l'ovariectomia, utilizzando un bisturi monouso, praticare un'incisione dorsale di un centimetro longitudinalmente dalla base della coscia verso l'alto, assicurandosi che solo la pelle e la fascia sottocutanea siano incise ed evitando di tagliare il peritoneo posteriore.
Quindi, tira l'incisione verso sinistra per visualizzare un cuscinetto di grasso bianco. Usando micropinze e forbici, taglia 0,5 centimetri lungo il cuscinetto di grasso bianco per esporre la cavità intraperitoneale. Dopo aver tagliato il peritoneo posteriore, utilizzando una micropinza, rimuovere lentamente e delicatamente il cuscinetto adiposo bianco dalla cavità intraperitoneale.
Subito dopo la rimozione, inumidire il tessuto adiposo bianco con una garza sterile imbevuta di soluzione salina allo 0,9%. Nella parte inferiore del cuscinetto adiposo bianco, identifica le sostanze granulari rosa come ovaie e assicurati che siano collegate all'utero. Utilizzando punti di sutura riassorbibili 5O, legare l'estremità ovarica dell'utero.
Quindi, rimuovere l'ovaio sinistro, evitando il contatto diretto tra gli strumenti chirurgici e le ovaie, impedendo l'impianto intraperitoneale del tessuto ovarico. Dopo l'intervento chirurgico, riposizionare con cura il cuscinetto di grasso bianco nella cavità intraperitoneale. Quindi, utilizzando una sutura riassorbibile 5-0, eseguire una sutura intermittente sul peritoneo posteriore.
Pulire eventuali aree di sanguinamento con una garza imbevuta di soluzione fisiologica sterile allo 0,9%. Quindi, tirare l'incisione cutanea verso destra e rimuovere l'ovaio destro utilizzando lo stesso metodo. Eseguire una sutura intermittente con punti di sutura 4-0 non assorbibili e pulire eventuali emorragie con garza sterile imbevuta di soluzione salina allo 0,9%.
Dopo aver completato entrambe le suture, pulire la ferita con una soluzione di iodoforo. Dopo 24 ore, iniettare meloxicam per via sottocutanea per alleviare il dolore. Monitorare il topo quotidianamente per confermare la corretta guarigione della ferita chirurgica senza segni di complicanze.
Dopo tre giorni, nutrire il topo con estradiolo valerato appena preparato. Per l'iniezione di FSH, preparare la soluzione di FSH sciogliendo la polvere di FSH umano ricombinante in soluzione salina sterile allo 0,9% a 100 unità internazionali per millilitro. A seconda dell'attività biologica dell'FSH ricombinante, somministrare solvente o diverse dosi di FSH ricombinante tramite iniezione intraperitoneale per due settimane.
Le immagini striscio delle cellule colorate con Papanicolaou hanno identificato chiaramente gli stadi del proestro, dell'estro, del metestrus e del diestro del ciclo dell'estro. Al contrario, i topi con ovariectomia bilaterale hanno perso il ciclo dell'estro. Il metodo ELIZA ha mostrato una diminuzione significativa dei livelli sierici di estradiolo nei topi con ovariectomia bilaterale rispetto ai topi del gruppo fittizio.
L'estrogeno endogeno sintetizzato nel tessuto gonadico extra non influisce sulla stabilità dei livelli di estrogeni nel modello murino trattato con FSH.
