まず、手術用のベンチエリアが60センチメートル×60センチメートルの部屋で手術台のセットアップを準備します。表面を70%アルコールできれいにし、使い捨ての医療用タオルで覆います。その後、紫外線で30分間消毒します。
8週齢の雌のC57ブラック/6マウスを手術前の1週間、飼育施設に順応させる。清潔な綿棒を使用して、麻酔をかけたマウスの背面に脱毛ローションを塗ります。3〜5分後、ガーゼと綿棒を使用して毛を取り除きます。
次に、70%エタノールで皮膚をきれいにします。ゴムストリップまたは綿ロープを使用してマウスを背中を上にして手術台に固定し、ヨードフォア溶液を塗布して背中をきれいにします。卵巣摘出術では、使い捨てメスを使用して、大腿部基部から上に向かって背側を縦方向に1センチメートル切開し、皮膚と皮下筋膜のみを切開し、後腹膜を切開しないようにします。
次に、切開部を左に引いて、白い脂肪パッドを視覚化します。マイクロ鉗子とハサミを使用して、白い脂肪パッドに沿って0.5センチメートルを切り、腹腔を露出させます。後腹膜を切開した後、マイクロ鉗子を使用して、腹腔内から白色脂肪パッドをゆっくりと静かに取り外します。
除去後すぐに、0.9%滅菌生理食塩水に浸したガーゼで白色脂肪組織を湿らせます。白い脂肪パッドの下部で、ピンク色の顆粒状物質を卵巣として識別し、それらが子宮に接続されていることを確認します。5O吸収性縫合糸を使用して、子宮の卵巣端を結紮します。
次に、手術器具と卵巣が直接接触しないようにして、左の卵巣を切除し、卵巣組織の腹腔内移植を防ぎます。手術後、白色脂肪パッドを慎重に腹腔内に戻します。次に、5-0吸収性縫合糸を使用して、後腹膜に断続的な縫合を行います。
0.9%滅菌生理食塩水に浸したガーゼで出血した部分をきれいにします。次に、皮膚切開部を右に引っ張り、同じ方法で右卵巣を摘出します。4-0の非吸収性縫合糸で断続的に縫合を行い、0.9%滅菌生理食塩水に浸したガーゼで出血を取り除きます。
両方の縫合が完了したら、ヨードフォア溶液で傷口をきれいにします。24時間後、痛みを和らげるためにメロキシカムを皮下に注射します。.マウスを毎日監視して、合併症の兆候がなく、適切な外科的創傷治癒を確認します。
3日後、調製したばかりのエストラジオール吉草酸をマウスに与える。FSH注射の場合は、組換えヒトFSH粉末を0.9%滅菌生理食塩水に100国際単位/ミリリットルに溶解してFSH溶液を調製します。組換えFSHの生物学的活性に応じて、腹腔内注射を介して溶媒または異なる用量の組換えFSHを2週間投与します。
パパニコロウ染色細胞の塗抹画像は、発情周期の前発情期、発情期、発情期、発情期の段階を明確に特定しました。対照的に、両側卵巣摘出術マウスは発情周期を失った。ELIZA法は、両側卵巣摘出術マウスの血清エストラジオール濃度が偽群マウスと比較して有意に低下したことを示した。
生殖腺外組織で合成された内因性エストロゲンは、FSH処理マウスモデルにおけるエストロゲンレベルの安定性に影響を与えません。
