Para começar, prepare a montagem da plataforma cirúrgica em uma sala com área de bancada de 60 centímetros por 60 centímetros para a operação. Limpe a superfície com álcool a 70% e cubra-a com uma toalha médica descartável. Em seguida, desinfete a área com radiação ultravioleta por 30 minutos.
Aclimatar camundongos C57 pretos/6 fêmeas de oito semanas de idade ao alojamento por uma semana antes da cirurgia. Usando um cotonete limpo, aplique loção depilatória na parte de trás do rato anestesiado. Após três a cinco minutos, remova os pelos usando gaze e cotonetes.
Em seguida, limpe a pele com etanol 70%. Fixe o mouse na plataforma de cirurgia com as costas voltadas para cima usando uma tira de borracha ou corda de algodão e aplique solução de iodóforo para limpar as costas. Para a ooforectomia, usando bisturi descartável, faça uma incisão dorsal de um centímetro longitudinalmente da base da coxa para cima, garantindo que apenas a pele e a fáscia subcutânea sejam incisadas e evitando cortar o peritônio posterior.
Em seguida, puxe a incisão para a esquerda para visualizar um coxim de gordura branca. Com micropinça e tesoura, corte 0,5 centímetros ao longo do coxim de gordura branca para expor a cavidade intraperitoneal. Após o corte do peritônio posterior, com micropinças, remova lenta e suavemente o coxim gorduroso branco da cavidade intraperitoneal.
Imediatamente após a remoção, umedecer o tecido adiposo branco com gaze 0,9% estéril embebida em soro fisiológico. Na parte inferior do coxim de gordura branca, identifique as substâncias granulares rosas como ovários e certifique-se de que estão conectadas ao útero. Usando suturas absorvíveis de 5O, ligadura a extremidade ovariana do útero.
Em seguida, retirar o ovário esquerdo, evitando o contato direto entre os instrumentos cirúrgicos e os ovários, impedindo a implantação intraperitoneal de tecido ovariano. Após a cirurgia, coloque cuidadosamente o coxim de gordura branca de volta na cavidade intraperitoneal. Em seguida, com sutura absorvível 5-0, realizar sutura intermitente no peritônio posterior.
Limpe todas as áreas de sangramento com gaze embebida em soro fisiológico 0,9% estéril. Em seguida, puxe a incisão da pele para a direita e remova o ovário direito usando o mesmo método. Realizar sutura intermitente com pontos inabsorvíveis 4-0 e limpar qualquer sangramento com gaze 0,9% estéril embebida em soro fisiológico.
Após completar ambas as suturas, limpe a ferida com uma solução de iodóforo. Após 24 horas, injetar meloxicam por via subcutânea para aliviar a dor. Monitore o mouse diariamente para confirmar a cicatrização adequada da ferida cirúrgica sem sinais de complicações.
Após três dias, alimente o rato com valerato de estradiol preparado na hora. Para injeção de FSH, prepare a solução de FSH dissolvendo o pó de FSH humano recombinante em solução salina estéril a 0,9% para 100 unidades internacionais por mililitro. De acordo com a atividade biológica do FSH recombinante, administrar solvente ou diferentes doses de FSH recombinante via injeção intraperitoneal por duas semanas.
As baciloscopias das células coradas com Papanicolaou identificaram claramente os estágios de proestro, estro, metestro e diestro do ciclo estral. Em contraste, os camundongos ovariectomia bilateral perderam o ciclo estral. O método ELIZA mostrou uma diminuição significativa nos níveis séricos de estradiol em camundongos ovariectomizados bilaterais em comparação com os camundongos do grupo sham.
O estrógeno endógeno sintetizado no tecido extragonadal não afeta a estabilidade dos níveis de estrogênio no modelo de camundongos tratados com FSH.
