Para comenzar, prepare la configuración de la plataforma quirúrgica en una sala con un área de banco de 60 centímetros por 60 centímetros para la operación. Limpie la superficie con alcohol al 70% y cúbrala con una toalla médica desechable. Luego, desinfecte el área con radiación ultravioleta durante 30 minutos.
Aclimatar a una hembra de ocho semanas de edad C57 negro/6 ratón al alojamiento durante una semana antes de la cirugía. Con un hisopo de algodón limpio, aplique una loción depilatoria en la parte posterior del ratón anestesiado. Después de tres a cinco minutos, retire los pelos con gasa y bastoncillos de algodón.
A continuación, limpie la piel con etanol al 70%. Fije el ratón en la plataforma de cirugía con la espalda hacia arriba con una tira de goma o una cuerda de algodón, y aplique una solución de yodóforo para limpiar la espalda. Para la ovariectomía, con bisturí desechable, realizar una incisión dorsal de un centímetro longitudinalmente desde la base del muslo hacia arriba, asegurándose de que solo se incide la piel y la fascia subcutánea y evitando cortar el peritoneo posterior.
A continuación, tire de la incisión hacia la izquierda para visualizar una almohadilla de grasa blanca. Con micropinzas y tijeras, corte 0,5 centímetros a lo largo de la almohadilla de grasa blanca para exponer la cavidad intraperitoneal. Después de cortar el peritoneo posterior, con micropinzas, retire lenta y suavemente la almohadilla de grasa blanca de la cavidad intraperitoneal.
Inmediatamente después de la extracción, humedezca el tejido graso blanco con una gasa estéril empapada en solución salina al 0,9%. En la parte inferior de la almohadilla de grasa blanca, identifique las sustancias granulares rosadas como ovarios y asegúrese de que estén conectadas al útero. Usando suturas absorbibles de 5O, ligar el extremo ovárico del útero.
A continuación, extirpar el ovario izquierdo, evitando el contacto directo entre los instrumentos quirúrgicos y los ovarios, evitando la implantación intraperitoneal del tejido ovárico. Después de la cirugía, vuelva a colocar con cuidado la almohadilla de grasa blanca en la cavidad intraperitoneal. A continuación, utilizando una sutura reabsorbible 5-0, realizar una sutura intermitente en el peritoneo posterior.
Limpie cualquier área de sangrado con una gasa empapada en solución salina estéril al 0,9 %. A continuación, tire de la incisión en la piel hacia la derecha y extraiga el ovario derecho con el mismo método. Realice una sutura intermitente con suturas no absorbibles 4-0 y limpie cualquier sangrado con gasa estéril empapada en solución salina al 0,9%.
Después de completar ambas suturas, limpie la herida con una solución de yodóforo. Después de 24 horas, inyecte meloxicam por vía subcutánea para aliviar el dolor. Monitoree el ratón diariamente para confirmar la cicatrización adecuada de la herida quirúrgica sin signos de complicaciones.
Después de tres días, alimente al ratón con valerato de estradiol recién preparado. Para la inyección de FSH, prepare la solución de FSH disolviendo polvo de FSH humano recombinante en solución salina estéril al 0,9% a 100 unidades internacionales por mililitro. De acuerdo con la actividad biológica de la FSH recombinante, administrar disolvente o diferentes dosis de FSH recombinante mediante inyección intraperitoneal durante dos semanas.
Las imágenes de frotis de las células teñidas con Papanicolaou identificaron claramente las etapas de proestro, estro, metestro y diestro del ciclo estral. Por el contrario, los ratones de ovariectomía bilateral perdieron el ciclo de celo. El método ELIZA mostró una disminución significativa de los niveles séricos de estradiol en ratones con ovariectomía bilateral en comparación con los ratones del grupo simulado.
El estrógeno endógeno sintetizado en el tejido extragonadal no afecta a la estabilidad de los niveles de estrógeno en el modelo de ratón tratado con FSH.
