Для начала перенесите зараженные вирусом растения картофеля в камеру роста, поддерживаемую температурой 22 градуса по Цельсию. Выберите растение для наблюдения, и используйте клейкую ленту, чтобы полностью обездвижить второй привитый лист. Далее подключите цифровой микроскоп к компьютеру и запустите программное обеспечение для захвата изображения.
Поместите лист под микроскоп. Затем с помощью диска сфокусируйтесь на поверхности листа. Чтобы настроить параметры камеры, нажмите кнопку Настройки.
Теперь установите яркость на 64, контрастность на 14 и оттенок на ноль. Далее отрегулируйте баланс белого. Затем установите насыщенность на 47, резкость на ноль, а гамму на пять.
Нажмите на значок захвата изображения и выберите опцию «Замедленное видео». Затем настройте захват изображения каждые 15 минут в течение 24 часов. Нажмите кнопку «Пуск», чтобы начать захват изображения.
Чтобы сохранить отснятые изображения, выберите все изображения и нажмите значок «Сохранить». Теперь выберите параметры экспорта. Затем установите максимальное количество точек на дюйм.
После сохранения удалите все изображения из программы. Чтобы отредактировать изображения, запустите программное обеспечение для редактирования, например ImageJ. Нажмите «Файл», затем выберите «Импорт» и выберите «Последовательность изображений», чтобы импортировать временные последовательности изображений из одного поля зрения.
Вставьте путь к каталогу сохраненных картинок и нажмите Ok. Как только преобразование будет завершено, ImageJ автоматически запустит внутренний видеоплеер, отображающий готовое видео. Нажмите «Файл», затем «Сохранить как» и выберите формат AVI, чтобы экспортировать видеофайл.
Когда откроется небольшое окно, установите частоту кадров 0,3 кадра в секунду, затем нажмите «ОК», чтобы сохранить видео в виде файла AVI. Для цифрового микроскопического анализа использовали трех-четырехнедельные инокулированные растения картофеля с не менее чем тремя-четырьмя полностью развитыми листьями. Одна и та же область на инокулированном листе наблюдалась с 15-минутными интервалами, чтобы определить возникновение поражения и расширение с течением времени.
Через 14 часов наблюдения поражения не было обнаружено. Примерно через 90 минут было зафиксировано видимое поражение. Поражение начало расширяться через два часа и продолжало расширяться в течение следующих восьми с половиной часов.
