Entfernen Sie zunächst die Haare aus dem präkordialen Bereich der anästhesierten Maus mit Haarentfernungscreme und positionieren Sie die Maus mit dem Rücken nach unten auf der physiologischen Überwachungsplattform. Tragen Sie eine kleine Menge leitfähiges Gel auf das Kupferblech auf dem physiologischen Überwachungstisch auf. Befestigen Sie die Mauspause auf diesem Gel, um die Erfassung von Elektrokardiogramm- und Atmungsdaten zu erleichtern.
Tragen Sie eine kleine Menge Ultraschall-Transmissionsgel auf, um eine optimale Bildqualität zu gewährleisten. Richten Sie die Plattform seitlich in einem kleinen Winkel zwischen Sonde und Plattform aus und erhalten Sie eine parasternale Längsachsenansicht des Herzens. Suchen Sie dann den geeigneten Herzabschnitt im B-Modus.
Aktivieren Sie den Farbdoppler auf dem Touchscreen und bewegen Sie die Sonde leicht, um die richtige Position zu finden. Wechseln Sie nun in den Pulswellenmodus, indem Sie die entsprechende Taste drücken. Positionieren Sie die gelbe Indikatorlinie auf der Koronararterie parallel zur Flussrichtung und klicken Sie auf die Schaltfläche Clip speichern, um die Basisdaten zu dokumentieren.
Erhöhen Sie die Isoflurankonzentration auf 3% und warten Sie 30 Sekunden. Stellen Sie sicher, dass die Strömungsgeschwindigkeit mit der Zeit allmählich zunimmt. Drücken Sie häufig die Schaltfläche "Clip speichern", um den Blutfluss mit der höchsten Geschwindigkeit zu erfassen.
Entfernen Sie das Tier nach Abschluss der echokardiographischen Bildgebung vorsichtig von der Plattform. Verwenden Sie die Peak-Velocity-Funktionswerkzeuge, um die diastolischen Spitzengeschwindigkeiten zu messen und die systolische Funktion des Herzens anhand der aufgenommenen Bilder zu beurteilen. Berechnen Sie die CFR, indem Sie die diastolische maximale koronare Flussgeschwindigkeit bei maximalem Fluss durch die diastolische maximale koronare Flussgeschwindigkeit zu Studienbeginn dividieren.
Führen Sie eine Thorakotomie am vierten Interkostalraum durch, um das Herz freizulegen. Ligatieren Sie dann die LAD-Arterie mit einer 5-0-Seidennaht. Verifizierung der Ischämie bei Mäusen durch visuelle Bestätigung der Visualisierung der nachgeschalteten Verfärbung im ischämischen Myokard.
Führen Sie einen LAD-Arterienverschluss für 30 Minuten durch. Lösen Sie dann die Ligatur und bestätigen Sie die Reperfusion, indem Sie die Rötung des verfärbten Herzmuskelbereichs ein bis zwei Minuten lang überwachen. Nach dem Koronarverschluss und der Reperfusion schließen Sie die Brust in Schichten und lassen Sie die Mäuse etwa eine halbe Stunde lang erholen.
Messen Sie den CFR 1, 3, 5, 8, 24 und 48 Stunden nach der Reperfusion erneut, wie zuvor gezeigt. Vor der Ischämie-Reperfusionsoperation wurde der CFR-Ausgangswert gemessen und die Mäuse hatten einen normalen CFR-Wert. Nach der Operation kam es jedoch zu einer deutlichen Abnahme der CFR nach einer Stunde Reperfusion.
Mit zunehmender Verlängerung der Reperfusionszeit blieben die CFR-Werte konstant niedrig, was darauf hindeutet, dass die Hypoperfusion mindestens zwei Tage anhalten könnte. Es wurden keine signifikanten Veränderungen in der linksventrikulären Herzfunktion beobachtet, wenn die CFR bei den Mäusen signifikant reduziert war.
