Begin met het onderdompelen van het gespleten muizennetvlies met aangehechte nitrocellulosemembranen in 4% paraformaldehyde op ijs gedurende 30 minuten. Vervang vervolgens de paraformaldehyde door 5 tot 10 milliliter PBS op kamertemperatuur om de gespleten netvliezen te wassen. Voordat u het gespleten netvlies van de nitrocellulose verwijdert, gebruikt u een hydrofobe barrièrepen om cirkelvormige putjes op een microscoopglaasje te bereiden.
Laat de putjes 5 tot 10 minuten aan de lucht drogen. Plaats daarna de gespleten netvliezen in de voorbereide putjes en voeg voldoende PBS toe om ze onder te dompelen. Til onder een dissectiemicroscoop voorzichtig de randen van het weefsel op met een fijn penseel en cirkel rond het netvlies om het van het membraan te scheiden.
Gebruik een pincet en het penseel om het vlies onder het zwevende deel van het netvlies vandaan te halen. Zuig vervolgens voorzichtig de resterende PBS weg, zodat het netvliesweefsel op de ganglioncelzijde van het microscoopglaasje rust. Immunofluorescentie-etikettering van synaptofysine over de bovenkant van het gespleten netvlies gaf aan dat de synaptische uiteinden van de fotoreceptor behouden bleven.
Fotoreceptorkernen waren echter afwezig, wat bevestigt dat het netvlies door de fotoreceptoraxonen is gesplitst. Synaptische integriteit werd beoordeeld door RGS11 te labelen in ON-BC-dendrieten en CtBP2 in synaptische linten van fotoreceptoren. Splitsing heeft de morfologie van de fotoreceptoruiteinden in de buitenste plexiforme laag niet beschadigd.
De levensvatbaarheid van RBC in het gespleten netvlies werd beoordeeld met behulp van een nabij-infrarood nucleaire kleurstof. Regionale variabiliteit in de levensvatbaarheid van cellen in het weefsel werd waargenomen met een hogere celdood in sommige gebieden, waarbij de meeste rode bloedcellen levensvatbaar bleven na splitsing. Immunofluorescentie-etikettering van RBC's tegen PKC-alfa en horizontale cellen tegen Calbindin-D toonde een snelle diffusie van antilichamen in het gespleten netvlies na een uur incubatie.