30 मिनट के लिए बर्फ पर 4% पैराफॉर्मलडिहाइड में संलग्न नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली के साथ विभाजित माउस रेटिना को डुबोकर शुरू करें। इसके बाद, विभाजित रेटिना को धोने के लिए 5 से 10 मिलीलीटर कमरे के तापमान पीबीएस के साथ पैराफॉर्मलडिहाइड को बदलें। नाइट्रोसेल्यूलोज से विभाजित रेटिना को हटाने से पहले, माइक्रोस्कोप स्लाइड पर गोलाकार कुएं तैयार करने के लिए हाइड्रोफोबिक बैरियर पेन का उपयोग करें।
कुओं को 5 से 10 मिनट तक हवा में सूखने दें। बाद में, विभाजित रेटिना को तैयार कुओं में रखें और उन्हें विसर्जित करने के लिए पर्याप्त पीबीएस जोड़ें। एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत, धीरे से ऊतक के किनारों को एक महीन पेंटब्रश के साथ उठाएं और झिल्ली से अलग करने के लिए रेटिना के चारों ओर चक्कर लगाएं।
रेटिना के तैरते हुए टुकड़े के नीचे से झिल्ली को हटाने के लिए फोर्सप्स और पेंटब्रश का उपयोग करें। फिर शेष पीबीएस को ध्यान से हटा दें, ताकि रेटिना ऊतक माइक्रोस्कोप स्लाइड गैंग्लियन सेल साइड पर आराम करे। विभाजित रेटिना के शीर्ष पर सिनैप्टोफिसिन के इम्यूनोफ्लोरेसेंस लेबलिंग ने संकेत दिया कि फोटोरिसेप्टर सिनैप्टिक टर्मिनलों को बरकरार रखा गया था।
हालांकि, फोटोरिसेप्टर नाभिक अनुपस्थित थे, जो फोटोरिसेप्टर अक्षतंतु के माध्यम से रेटिना विभाजन की पुष्टि करते थे। सिनैप्टिक अखंडता का मूल्यांकन ऑन-बीसी डेंड्राइट में आरजीएस 11 और फोटोरिसेप्टर सिनैप्टिक रिबन में सीटीबीपी 2 को लेबल करके किया गया था। विभाजन ने बाहरी प्लेक्सीफॉर्म परत में फोटोरिसेप्टर टर्मिनलों की आकृति विज्ञान को नुकसान नहीं पहुंचाया।
विभाजित रेटिना में आरबीसी व्यवहार्यता का मूल्यांकन निकट अवरक्त परमाणु डाई का उपयोग करके किया गया था। ऊतक में सेल व्यवहार्यता में क्षेत्रीय परिवर्तनशीलता कुछ क्षेत्रों में उच्च कोशिका मृत्यु के साथ देखी गई थी, जिसमें अधिकांश आरबीसी विभाजन के बाद व्यवहार्य बने हुए थे। पीकेसी अल्फा के खिलाफ आरबीसी के इम्यूनोफ्लोरेसेंस लेबलिंग और कैलबिनडिन-डी के खिलाफ क्षैतिज कोशिकाओं ने एक घंटे इनक्यूबेशन के बाद विभाजित रेटिना में तेजी से एंटीबॉडी प्रसार दिखाया।