Inizia immergendo la retina di topo divisa con membrane di nitrocellulosa attaccate in paraformaldeide al 4% su ghiaccio per 30 minuti. Successivamente, sostituisci la paraformaldeide con 5-10 millilitri di PBS a temperatura ambiente per lavare le retine divise. Prima di rimuovere la retina divisa dalla nitrocellulosa, utilizzare una penna barriera idrofobica per preparare pozzetti circolari su un vetrino da microscopio.
Lascia asciugare i pozzetti all'aria per 5-10 minuti. Successivamente, posizionare le retine divise nei pozzetti preparati e aggiungere abbastanza PBS per immergerle. Sotto un microscopio da dissezione, sollevare delicatamente i bordi del tessuto con un pennello fine e girare intorno alla retina per separarla dalla membrana.
Usa una pinza e un pennello per rimuovere la membrana da sotto il pezzo galleggiante della retina. Quindi aspirare con cautela il PBS rimanente, in modo che il tessuto retinico poggi sul vetrino del microscopio con il lato della cellula gangliare rivolto verso il basso. La marcatura a immunofluorescenza della sinaptofisina nella parte superiore della retina divisa ha indicato che i terminali sinaptici dei fotorecettori sono stati mantenuti.
Tuttavia, i nuclei dei fotorecettori erano assenti, confermando la divisione della retina attraverso gli assoni dei fotorecettori. L'integrità sinaptica è stata valutata marcando RGS11 nei dendriti ON-BC e CtBP2 nei nastri sinaptici dei fotorecettori. La scissione non ha danneggiato la morfologia dei terminali dei fotorecettori nello strato plessiforme esterno.
La vitalità dei globuli rossi nella retina divisa è stata valutata utilizzando un colorante nucleare nel vicino infrarosso. È stata osservata una variabilità regionale nella vitalità cellulare in tutto il tessuto, con una maggiore morte cellulare in alcune aree, con la maggior parte dei globuli rossi che rimangono vitali dopo la scissione. La marcatura in immunofluorescenza dei globuli rossi contro PKC alfa e delle cellule orizzontali contro Calbindin-D ha mostrato una rapida diffusione degli anticorpi nella retina divisa dopo un'ora di incubazione.
