니트로셀룰로오스 막이 부착된 분할된 쥐 망막을 4% 파라포름알데히드에 30분 동안 얼음에 담그는 것으로 시작합니다. 다음으로, 파라포름알데히드를 5-10밀리리터의 실온 PBS로 대체하여 갈라진 망막을 세척합니다. 니트로셀룰로오스에서 분할된 망막을 제거하기 전에 소수성 장벽 펜을 사용하여 현미경 슬라이드에 원형 웰을 준비합니다.
우물을 5-10분 동안 자연 건조시킵니다. 그런 다음 분할된 망막을 준비된 우물에 넣고 PBS를 충분히 넣어 잠급니다. 박리 현미경으로 미세한 붓으로 조직의 가장자리를 부드럽게 들어 올리고 망막 주위를 돌면서 막에서 분리합니다.
집게와 붓을 사용하여 망막의 떠다니는 부분 아래에서 막을 제거합니다. 그런 다음 망막 조직이 현미경 위에 놓이도록 나머지 PBS를 조심스럽게 흡인하고 신경절 세포 쪽을 아래로 밉니다. 분할된 망막의 상단을 가로지르는 synaptophysin의 면역형광 표지는 광수용체 시냅스 말단이 유지되었음을 나타냅니다.
그러나 광수용체 핵이 없어 망막이 광수용체 축삭을 통해 분열된 것을 확인할 수 있었습니다. 시냅스 무결성은 ON-BC 수상돌기의 RGS11과 광수용체 시냅스 리본의 CtBP2를 표지하여 평가했습니다. 쪼개짐은 바깥쪽 망상층에 있는 광수용체 말단의 형태를 손상시키지 않았다.
분할 망막의 적혈구 생존율은 근적외선 핵 염료를 사용하여 평가되었습니다. 조직 전반에 걸친 세포 생존력의 지역적 변동성은 일부 영역에서 더 높은 세포 사멸로 관찰되었으며, 대부분의 RBC는 분열 후에도 생존 가능한 상태로 남아 있었습니다. PKC 알파에 대한 적혈구 및 Calbindin-D에 대한 수평 세포의 면역형광 표지는 1시간 배양 후 분할 망막에서 빠른 항체 확산을 보여주었습니다.
