Begynn med å senke den delte musehinnen med påførte nitrocellulosemembraner i 4% paraformaldehyd på is i 30 minutter. Deretter erstattes paraformaldehydet med 5 til 10 ml romtemperatur PBS for å vaske de delte netthinnene. Før du fjerner den delte netthinnen fra nitrocellulosen, bruk en hydrofob barrierepenn for å forberede sirkulære brønner på et mikroskoplysbilde.
La brønnene lufttørke i 5 til 10 minutter. Etterpå plasserer du de delte netthinnene i de forberedte brønnene og tilsetter nok PBS til å fordype dem. Under et disseksjonsmikroskop, løft forsiktig kantene på vevet med en fin pensel og sirkel rundt netthinnen for å skille den fra membranen.
Bruk tang og pensel for å fjerne membranen fra under det flytende stykket av netthinnen. Deretter aspirerer du forsiktig bort den gjenværende PBS, slik at netthinnevevet hviler på mikroskopets ganglioncelleside ned. Immunfluorescensmerking av synaptofysin over toppen av delt retina indikerte at fotoreseptorsynaptiske terminaler ble beholdt.
Imidlertid var fotoreceptorkjerner fraværende, noe som bekreftet retina splittet gjennom fotoreceptoraksonene. Synaptisk integritet ble vurdert ved å merke RGS11 i ON-BC-dendritter og CtBP2 i fotoreseptorsynaptiske bånd. Spalting skadet ikke morfologien til fotoreseptorterminaler i det ytre pleksiforme laget.
RBC-levedyktigheten i den delte netthinnen ble vurdert ved bruk av et nær infrarødt nukleært fargestoff. Regional variasjon i celle levedyktighet over vevet ble observert med høyere celledød i enkelte områder med de fleste RBC gjenværende levedyktige etter splitting. Immunfluorescensmerking av RBC mot PKC alfa og horisontale celler mot Calbindin-D viste rask antistoffdiffusjon i delt retina etter en times inkubasjon.
