Comece mergulhando a retina dividida do rato com membranas de nitrocelulose anexadas em paraformaldeído a 4% no gelo durante 30 minutos. Em seguida, substitua o paraformaldeído por 5 a 10 mililitros de PBS à temperatura ambiente para lavar as retinas divididas. Antes de remover a retina dividida da nitrocelulose, use uma caneta de barreira hidrofóbica para preparar poços circulares em uma lâmina de microscópio.
Deixe os poços secar ao ar por 5 a 10 minutos. Depois, coloque as retinas divididas nos poços preparados e adicione PBS suficiente para mergulhá-las. Sob um microscópio de dissecção, levante suavemente as bordas do tecido com um pincel fino e circule ao redor da retina para separá-la da membrana.
Use pinças e o pincel para remover a membrana de baixo do pedaço flutuante da retina. Em seguida, aspirar cuidadosamente o PBS restante, de modo que o tecido da retina descanse na lâmina do microscópio de células ganglionares de lado para baixo. A marcação por imunofluorescência da sinaptofisina no topo da retina dividida indicou que os terminais sinápticos dos fotorreceptores foram mantidos.
No entanto, os núcleos fotorreceptores estavam ausentes, confirmando a divisão da retina através dos axônios fotorreceptores. A integridade sináptica foi avaliada pela marcação de RGS11 em dendritos ON-BC e CtBP2 em fitas sinápticas fotorreceptoras. A bipartição não danificou a morfologia dos terminais fotorreceptores na camada plexiforme externa.
A viabilidade das hemácias na retina dividida foi avaliada usando um corante nuclear infravermelho próximo. Variabilidade regional na viabilidade celular ao longo do tecido foi observada com maior morte celular em algumas áreas, com a maioria das hemácias permanecendo viável após a divisão. A marcação por imunofluorescência de hemácias contra PKC alfa e células horizontais contra Calbindina-D mostrou rápida difusão de anticorpos na retina dividida após uma hora de incubação.