Bölünmüş fare retinasını bağlı nitroselüloz membranlarla birlikte %4 paraformaldehit içinde 30 dakika boyunca buz üzerinde daldırarak başlayın. Daha sonra, bölünmüş retinaları yıkamak için paraformaldehiti 5 ila 10 mililitre oda sıcaklığında PBS ile değiştirin. Bölünmüş retinayı nitroselülozdan çıkarmadan önce, bir mikroskop lamı üzerinde dairesel kuyucuklar hazırlamak için hidrofobik bir bariyer kalem kullanın.
Kuyuların 5 ila 10 dakika kurumasını bekleyin. Daha sonra, bölünmüş retinaları hazırlanan kuyucuklara yerleştirin ve daldırmak için yeterli PBS ekleyin. Diseksiyon mikroskobu altında, dokunun kenarlarını ince bir boya fırçasıyla hafifçe kaldırın ve zardan ayırmak için retinanın etrafında daire çizin.
Retinanın yüzen parçasının altındaki zarı çıkarmak için forseps ve boya fırçası kullanın. Daha sonra kalan PBS'yi dikkatlice aspire edin, böylece retina dokusu mikroskop üzerinde durur ganglion hücre tarafı aşağı iner. Bölünmüş retinanın üst kısmındaki sinaptofizin immünofloresan etiketlemesi, fotoreseptör sinaptik terminallerinin korunduğunu gösterdi.
Bununla birlikte, fotoreseptör çekirdekleri yoktu ve retinanın fotoreseptör aksonları boyunca bölündüğünü doğruladı. Sinaptik bütünlük, ON-BC dendritlerinde RGS11 ve fotoreseptör sinaptik şeritlerinde CtBP2 etiketlenerek değerlendirildi. Bölünme, dış pleksiform tabakadaki fotoreseptör terminallerinin morfolojisine zarar vermedi.
Bölünmüş retinadaki RBC canlılığı, yakın kızılötesi nükleer boya kullanılarak değerlendirildi. Doku boyunca hücre canlılığında bölgesel değişkenlik, bazı bölgelerde daha yüksek hücre ölümü ile gözlendi ve çoğu RBC bölündükten sonra canlı kaldı. RBC'lerin PKC alfa'ya karşı immünofloresan işaretlemesi ve Calbindin-D'ye karşı yatay hücreler, bir saatlik inkübasyondan sonra bölünmüş retinada hızlı antikor difüzyonu gösterdi.
