preparing matrix gel with vascular cells for in vivo matrix gel plug assay

פישוט מחקרי אנגיוגנזה עם בדיקת תקע ג'ל מטריצה שונה

Angiogenesis, the process of formation of neo-vessels from pre-existing vessels, plays a critical role in many physiological and pathological processes, such as embryonic development, wound healing, atherosclerosis, tumor development, etc.1,2,3,4,5. This dynamic process involves several steps, including the degradation of the matrix, vascular cell proliferation, migration and self-organization to form tubular structures and the stabilization of the neo-vessels6. Promoting angiogenesis has been demonstrated to be critical in the treatment of myocardial infarction, stroke and other kinds of ischemic diseases7 while inhibiting angiogenesis has been considered a promising strategy in the treatment of cancers8 and rheumatoid diseases9. Angiogenesis has been considered an organizing principle for drug discovery10. Thus, the construction of a reliable and convenient method to assess the extent of angiogenesis is critical for mechanical research or drug discovery in angiogenesis-dependent diseases.
Several in vitro and in vivo models have been developed to evaluate angiogenesis11. Among these, two-dimensional (2-D) models, like matrix gel tube formation assay12, cannot form functional tubular structures. The animal models, such as the hind limb ischemia model13,14, can reproduce the angiogenesis process but are complex and require a laser speckle blood flow imaging system. 3D models of vascular morphogenesis, like matrix gel plug assay, provide a simple platform that can mimic the process of angiogenesis in vivo15, but the detection of angiogenesis requires immunohistochemistry or immunofluorescence staining16,17,18, which are variable and poorly visualized.
Here, we describe a protocol for a modified matrix gel plug assay where vascular cells were mixed with matrix gel and subcutaneously injected into the back of mice to form a plug. In the plug, vascular cells need to degrade the matrix, proliferate, migrate, and self-organize to finally form functional vessels with blood flow in the internal environment. Thereafter, fluorescent-labeled dextran is injected via the tail vein, to flow through the plug, and the label is visualized to indicate neo-vessels. The content of angiogenesis can be quantitatively evaluated by the length of the vessels. This method can form functional vessels that cannot be produced in 2-D angiogenesis models12, and does not need complex stain process as in ordinary matrix gel plug assay11. It also does not require expensive specific instruments like laser speckle blood flow imaging system in hind limb ischemia model13,14,19. This method is versatile, low-cost, quantifiable, and easy to perform, and can be used to determine the pro- or anti-angiogenic capability of drugs or be used in mechanical research involved in angiogenesis.

מחבר זרקור: חקירת אנגיוגנזה וחדירות כלי דם באמצעות בדיקת תקע ג'ל מטריצה שונה

שונה בבדיקת תקע ג'ל מטריצת Vivo למחקרי אנגיוגנזה

Our research deals with angiogenesis, the process of formation of new vessels from preexisting vessels. It plays a critical role in many physiological and pathological processes, such as embryonic development or curing atherosclerosis, tumor development, etc. The construction of a reliable model to evaluate the extent of angiogenesis is critical for myocardial research or the discovery of medicines for angiogenesis-depend diseases.However, most of the existing models are complex, expensive, and require specialized equipment. Here, we present a modified matrix gel plug assay that can be used to investigate angiogenesis and vessel permeability without staining in a simple, more intuitive, as well as efficient manner.

הכנת ג'ל מטריקס עם תאי כלי דם לבדיקת תקע ג'ל In Vivo Matrix

כדי להתחיל, להכין 10 פעמים M199 מדיום תרבית על ידי המסת אבקת M199 לריכוז פי 10 ב 90 מיליליטר של מים deionized, ואחריו תוספת של 10 מיליליטר של FBS. סנן את התמיסה דרך מסנן 0.22 מיקרון. את המדיום המסונן ניתן לאחסן בארבע מעלות צלזיוס למשך עד חודשיים.להכנת ג'ל מטריצה עם תאי כלי הדם, להשתמש כ 2 מיליון תאים וסקולריים. מצננים את הצינור הסטרילי בקוטר 1.5 מיליליטר המכיל את גלולת התא שהוכנה כראוי באמבט קרח. הפשירו את ג'ל המטריקס לחלוטין באמבט קרח מבלי לערבב או לערבל אותו.באופן דומה, לקרר את מוכן מוכן 10 פעמים M199 תרבית מדיה יחד עם מגיב הבדיקה או התרופה של עניין ארבע מעלות צלזיוס. לאחר מכן, שמירה על יחס נפח של 8.8 ל -1 עד 0.2, שלב את ג'ל המטריצה המקורר מראש עם מדיה מקוררת מראש 10 פעמים M199 המכילה 10% FBS, ואת מגיב הבדיקה מקורר מראש כדי לייצר את תערובת ג'ל המטריצה. לבסוף, להשעות מחדש את התאים מקוררים מראש ב 400 מיקרוליטר של תערובת ג'ל מטריצה מוכן על ידי ערבוב עדין כדי למנוע יצירת בועות.שמור את הצינור המכיל את התאים בג'ל מטריצה על קרח עד שהעכברים מוכנים להזרקת ג'ל המטריצה.

Research

JoVE Journal

Biology

Preparing Matrix Gel with Vascular Cells for In Vivo Matrix Gel Plug Assay

Modified In Vivo Matrix Gel Plug Assay for Angiogenesis Studies

Several models have been developed to investigate angiogenesis in vivo. However, most of these models are complex and expensive, require specialized ...

Preparing Vascular Cells for In Vivo Matrix Gel Plug Assay

הכנת תאי כלי דם לבדיקת תקע ג'ל In Vivo Matrix

Matrix Gel Mixture Injection into Mouse for Matrix Gel Plug Assay

הזרקת תערובת ג'ל מטריקס לעכבר לבדיקת תקע ג'ל מטריקס

Dextran-FITC Injection and Matrix Gel Plug Collection from Mouse for Matrix Gel Plug Assay

הזרקת Dextran-FITC ואוסף תקע ג'ל מטריקס מעכבר לבדיקת תקע ג'ל מטריקס