Neem om te beginnen de voorbereide menselijke ontlastingsmonsters. Koel de koelcentrifuge met hoge snelheid af tot 4 graden Celsius. Gebruik PBS om het gewicht van de monsterbuisjes in te stellen op 0,1 gram en centrifugeer ze gedurende 20 minuten bij 3.000 g bij 4 graden Celsius.
Breng het supernatans met een plastic pipet over in twee buisjes van 50 milliliter, waarbij u 1 milliliter achterlaat. Centrifugeer vervolgens het supernatans bij 12.000 G gedurende 30 minuten bij 4 graden Celsius. Gebruik een spuit van 20 milliliter, zuig de supernatant op en verwijder de naald uit de spuit.
Filtreer de vloeistof door filters van 0,22 micrometer in buizen van 50 milliliter. Veeg vervolgens de emmer af met 75% alcohol om eventuele resterende verontreiniging te verwijderen. Breng ongeveer 30 milliliter van het gefilterde fecale supernatans over in de ultracentrifugebuis.
Vul de buis met ongeveer 8 milliliter PBS en laat een opening van 3 millimeter over vanaf de opening van de buis. Plaats de twee ultracentrifugebuisjes in tegenoverliggende ultracentrifugatie-emmers en egaliseer het gewicht van de twee emmers met PBS. Laad alle bakken op de rotor, ongeacht of ze met buizen zijn geladen.
Plaats de monsters in de centrifuge, start het vacuüm en draai ze gedurende 70 minuten op 160.000 G bij 4 graden Celsius. Zodra het centrifugeren is voltooid, laat u het kamervacuüm los en opent u de deur van de ultracentrifuge. Verwijder vervolgens onmiddellijk de rotor.
Breng de emmers over van de rotor naar het rek en pak de buizen op met een tang. Gooi het supernatant weg en bewaar de zichtbare bruine pellets. Voeg 1 milliliter voorgekoelde PBS toe om de pellets volledig te resuspenderen.
Vul de buis met ongeveer 37 milliliter PBS en laat een opening van 3 millimeter over vanaf de opening. Na het uitvoeren van nog een ronde ultracentrifugatie, gooit u het supernatans weg en laat u de buis 5 minuten omgekeerd staan. Verwijder eventuele resterende oplossing op de binnenwand met ruitenwissers.
Voeg met een pipet van 1.000 microliter 1,2 milliliter voorgekoelde PBS toe om pellets te resuspenderen en meng ze door te pipetteren. Breng 1,2 milliliter van de PBS BEV-oplossing over van een ultracentrifugebuis naar een schone microbuis van 1,5 milliliter.